近期,一项发表于《Nature Biotechnology》的研究《CRISPR-StAR enables high-resolution genetic screening in complex in vivo models》引入了CRISPR-StAR(CRISPR Screening with Transient Activity and Repression)技术,这一创新方法不仅
CRISPR-StAR:一种突破体内基因筛选瓶颈的新方法 面对传统CRISPR基因筛选在体内模型中的瓶颈效应和数据噪声问题,研究人员开发出了这种创新技术——CRISPR-StAR(Stochastic Activation by Recombination),为基因功能筛选带来了突破性的解决方案。CRI...
CRISPR-Cas9技术在体外培养的细胞中已经可以用于大规模的筛选，但是CRISPR筛选想要在动物体内进行仍然是很大的挑战，因为大量携带突变的动物的产生、鉴定以及持续追踪并非易事。为此，美国犹他大学Randall T.Peterson研究组在Science发文题为MIC-Drop: A platform for large-scale in vivo CRISPR screens，通过多组分显微注...
体内实验证明,CALHM2的敲除能够显著增加人类原代NK细胞及CAR-NK细胞的毒性,脱颗粒性及肿瘤浸润。 总的来说,该研究通过体内AAV-SB-CRISPR和TINK scRNA-seq发现了可能作为基因检查点的自然抑制NK细胞功能的内源基因——CALHM2,并展示了敲除CALHM2基因来构建增强型NK细胞疗法的潜力。 (叶子璇 摘译)...
综上，作者通过建立体内的CRISPR-Cas9筛选方式，筛选到了一些AML潜在的治疗靶点，克服了体外筛选的缺点。该筛选方式可以进一步扩大筛选的文库大小，一些可能在体外培养条件下对于AML生长并不起决定作用的基因却可能在体内却起着重要的作用，因此可以用该方法，扩大筛选文库筛选出更多的AML潜在的治疗靶点，对于相关药物的设计...
图1 AAV-CRISPR筛选策略 通过将抑癌基因(mTSG)库(该库包含针对Trp53的sgRNA,用于促进小鼠组织的肿瘤发生,亦包含其他的显著突变基因靶点sgRNA)注射到脑中,配合MRI扫描,作者发现注射mTSG库的动物明显出现了肿瘤,且动物的生存周期亦明显降低(图2)。这说明AAV-CRISPR策略能够在小鼠体内诱导肿瘤的产生。
在这项研究中,科学家们基于CRISPR-Cas9的体内靶向筛选,探索了原代CD4+ T细胞一碳(1C)代谢的功能。研究发现MTHFD2是控制效应性T细胞和调节性T细胞命运和功能的一个代谢检查点,可作为治疗多种炎症性疾病的潜在靶点。 ▲ 基于CRISPR-Cas9的体内靶向筛选(图片来源:Immunity) ...
综上所述,该研究首次基于体内CRISPR/Cas9基因敲除文库筛选,鉴定出调控播散肿瘤细胞实现免疫逃逸并形成定植转移的关键基因Sgk1,并阐释了肿瘤细胞通过降低SGK1蛋白激酶活性以抵抗T细胞免疫杀伤的分子机制,探究了SGK1的临床意义及潜在转化价值,为肝癌转移的诊疗策略提供了新靶点和新思路。
2019年8月22日,耶鲁大学陈斯迪(Sidi Chen)课题组在Cell杂志上以长文形式发表文Systematic Immunotherapy Target Discovery Using Genome-Scale In Vivo CRISPR Screens in CD8 T Cells,利用过继性T细胞治疗(ACT)小鼠模型和体外CD8+ T细胞杀伤实验,在全基因组水平上对CD8+T细胞中与肿瘤免疫治疗相关的基因进行筛选,成功找...
利用体内CRISPR筛选系统探究T细胞的命运调控元件 报告人: 黄宏龄 博士(厦门大学生命科学学院) 主持人: 王忠芳教授 时间: 2023年11月10日(星期五)下午15:00-16:00 地点: 广州医科大学越秀校区10号楼1309会议室 讲座介绍: Our research interest lies in the immune signaling underlying the differentiation and funct...