然而,与普通基因药物相比,CRISPR/Cas9基因编辑系统非常大,比AAV载体的最大包装容量高出4.7kb。特别是,当Cas9携带效应蛋白时,需要特殊的修改才能在AAV载体中加载,例如使用较小的SaCas9或将递送系统分成两个载体。 将较小的Cas9直系同源物SaCas9的编码序列整合到调节盒中,...
CRISPR-Cas9作为新一代的基因编辑技术,在基因功能研究、模式动物构建、基因治疗等方面具有广阔的应用前景。目前,CRISPR-Cas9技术已广泛应用于生命科学研究的诸多领域,并且已用于地中海贫血症临床治疗试验,基因编辑技术将继续对生命科学研究、基因治疗、生物产业、伦理等产生广泛而深刻的影响。 ① 筛选目标基因 CRISPR-Cas9...
2013 年 1 月份,美国两个实验室在《Science》杂志发表了基于 CRISPR-Cas9 技术在细胞系中进行基因敲除的新方法,该技术与以往的技术不同,是利用靶点特异性的 RNA 将 Cas9 核酸酶带到基因组上的具体靶点,从而对特定基因位点进行切割导致突变。该技术迅速被运用到基因敲除小鼠和大鼠动物模型的构建之中。通过一系列研究...
2014年,Yin等报道了一项在成年小鼠体内进行的CRISPR/Cas9介导的HDR纠正Fah基因点突变的研究,证明了利用CRISPR/Cas9介导的基因编辑纠正基因突变在成年动物中是可行的,并且具有纠正人类遗传疾病基因突变的潜力。这种策略也被应用于其他类似遗传疾病的研究,如Yang等利用同样的技术成功...
1.设计gRNA：gRNA是由CRISPR-Cas9系统识别并切割目标DNA的关键部分。我们需要在目标基因中选择一个合适的靶点序列，设计gRNA来引导Cas9蛋白识别并切割该序列。耐思开发的Quick-KO®基因敲除试剂盒根据已知的人和小鼠编码基因，采用优化的预设计方案，相较于传统方案具有更高的敲除效率。2.构建质粒：质粒是携带CRISPR-...
随后的几个月内，科学家们迅速在小鼠、果蝇和大鼠等动物以及水稻和小麦等植物中实现了基因编辑，Schwank等人使用CRISPR/Cas9技术纠正了两名CFTR突变患者的肠道干细胞的致病突变。CRISPR/Cas9技术的第一个临床试验为将CRISPR/Cas9基因编辑的T细胞注射回患者体内，这是世界上首次向人类注射基因编辑的细胞，该研究表明了基因...
关于老鼠那些事儿(二)人源化小鼠 上一篇讲转基因小鼠,转基因小鼠可能是诱导突变,也可能是用Crisper/Cas9技术敲出,敲入或者替换靶基因的小鼠,而人源小鼠的构建则复杂得多。 构建人源小鼠,简单的理解就是先干掉小鼠自身的免疫系统,然后为人源造血干细胞的生长分化提供充分的条件,在小鼠体内建立一级和二级淋巴系统。
CRISPR/Cas系统在古细菌中证实之后，法国科学家Emmanuelle Charpentier和美国科学家Jennifer A.Doudna体外重现了CRISPR/Cas9系统的作用，并因此获得2020年诺贝尔化学奖。CRISPR/Cas系统作为一种高效的新兴基因编辑工具，被称为“基因魔剪”“上帝之手”，受到科学家们的广泛关注。It’s never too late to learn！那么，接...
CRISPR-Cas9系统的设计和优化 CRISPR-Cas9系统由Cas9核酸酶和一个导向RNA（gRNA）组成，是基因组编辑技术...