3)CROP-Seq是将U6-sgRNA表达盒大片段添加至Puro抗性基因后3′LTR区,这就限制了不能添加多个sgRNA。 Direct capture PerturbSeq则很好地解决了这些问题。Direct capture PerturbSeq是基于10×Gebomics公司的5′端和3′端的建库方法,开发了5′端和3′端两种检测sgRNA方案[5]。在5′端的检测方案中,针对sgRNA后面的...
在一项实验中,利用Perturb-Seq、CRISP-Seq或将这两种技术结合在一起研究众多基因扰动是可能的[3]。 Perturb-Seq和CRISP-Seq背后的工作原理是给单个基因扰动和受到影响的细胞添加条形码...阅读全文 平行标定两次的误差范围是多少 算误差要看你的滴定液的浓度,不过体积的误差一般要求不超过0.05ml,也就是1滴的样子。
3)CROP-Seq是将U6-sgRNA表达盒大片段添加至Puro抗性基因后3′LTR区,这就限制了不能添加多个sgRNA。 Direct capture PerturbSeq则很好地解决了这些问题。Direct capture PerturbSeq是基于10×Gebomics公司的5′端和3′端的建库方法,开发了5′端和3′端两种检测sgRNA方案[5]。在5′端的检测方案中,针对sgRNA后面的...
3)CROP-Seq是将U6-sgRNA表达盒大片段添加至Puro抗性基因后3′LTR区,这就限制了不能添加多个sgRNA。 Direct capture PerturbSeq则很好地解决了这些问题。Direct capture PerturbSeq是基于10×Gebomics公司的5′端和3′端的建库方法,开发了5′端和3′端两种检测sgRNA方案[5]。在5′端的检测方案中,针对sgRNA后面的...
CRISP-Seq的作用原理与Perturb-Seq相似。在CRISPR慢病毒载体中添加多聚腺苷独特向导标签(unique guide index,UGI)的表达盒,与GBC作用相似,用于标记sgRNA。经过单细胞测序,结合UGI与单细胞转录组数据,便能够对基因扰动进行深入而全面的表型分析,并在单个实验中研究它们的功能和相互作用[3]。
Perturb-Seq和CRISP-Seq背后的工作原理是给单个基因扰动和受到影响的细胞添加条形码以至于利用测序能够鉴定出这两者。简单地说,靶向感兴趣基因的添加独特条形码的CRISPR向导RNA文库被导入一个细胞群体中。随后利用添加独特条形码的引物将单个细胞的mRNA提取出。对这些mRNA进行测序揭示出CRISPR靶向基因和由此产生的单个细胞的转录...
Perturb-Seq和CRISP-Seq背后的工作原理是给单个基因扰动和受到影响的细胞添加条形码以至于利用测序能够鉴定出这两者。简单地说,靶向感兴趣基因的添加独特条形码的CRISPR向导RNA文库被导入一个细胞群体中。随后利用添加独特条形码的引物将单个细胞的mRNA提取出。对这些mRNA进行测序揭示出CRISPR靶向基因和由此产生的单个细胞的转录...
Perturb-Seq和CRISP-Seq背后的工作原理是给单个基因扰动和受到影响的细胞添加条形码以至于利用测序能够鉴定出这两者。简单地说,靶向感兴趣基因的添加独特条形码的CRISPR向导RNA文库被导入一个细胞群体中。随后利用添加独特条形码的引物将单个细胞的mRNA提取出。对这些mRNA进行测序揭示出CRISPR靶向基因和由此产生的单个细胞的转录...