给予他莫昔芬/ 4-羟基他莫昔芬后，会破坏 HSP90 与 CreER 的相互作用，使 CreER 进入细胞核，识别并切割 LoxP 位点间的 DNA 序列，从而实现条件性基因敲除[1]。为了提高他莫昔芬或 4-OHT 诱导的效率，在 CreERT 后产生 CreERT2，它在体内对 4-OHT 的敏感性约为 CreERT 的 10 倍。因此，CreERT2 在...
1. 他莫昔芬的配置和储存 他莫昔芬不溶于水,一般建议用玉米油溶解:可按照20mg/ml的终浓度进行配置,37℃摇晃过夜。由于玉米油太多会导致他莫昔芬溶解度变差,所以建议一次配置50mL以内的他莫昔芬溶液,配置完成后分装成1mL每管,-20℃避光保存,使用时避免反复冻融,正常半年内都是可以使用的。此外,他莫昔芬对光...
3.有没有建议的配繁顺序,是直接Cre和Flox配呢,还是Cre以及Flox各自配繁,得到各自的纯合再进行合笼呢? 4.他莫昔芬对于小鼠本身毒性及后续肝硬化造模的影响? 5.CreERT小鼠打他莫昔芬的时间,是不是越小诱导敲低效率越好呢?老年老鼠打了他莫昔芬好像敲低效果不理想? Q 如何判断Cre工具鼠的基因型? A A. 转...
可以使CreER只响应外源的人工合成雌激素(Tamoxifen或 4-OHT)的诱导。而CreERT2是CreERT的进一步改良版本,含有3个点突变C400V/M453A/L544A,其对他莫昔芬的响应更加灵敏和快速。 4. Split-Cre Split-Cre系统将Cre重组酶分为两个不活跃的部分(...
为了提高他莫昔芬或 4-OHT 诱导的效率,在 CreERT 后产生 CreERT2,它在体内对 4-OHT 的敏感性约为 CreERT 的 10 倍。因此,CreERT2 在一些生物学领域更受青睐[2]。 ▐ Tet-on 与 Tet-off 系统 除了Cre-ER (Tam) 系统外,Tet-on 和 Tet-off 系统也是常用的条件性基因表达系统。Tet 系统由逆四环素...
在没有 Tamoxifen 的情况下,CreER 融合蛋白与热休克蛋白 90 (HSP90) 相互作用并定位于细胞质中。给予他莫昔芬/ 4-羟基他莫昔芬后,会破坏 HSP90 与 CreER 的相互作用,使 CreER 进入细胞核,识别并切割 LoxP 位点间的 DNA 序列,从而实现条件性基因敲除[1]。
雌激素诱导型Cre,即CreER系统,也叫他莫昔芬(Tam)诱导的Cre系统。将Cre与雌激素受体ER融合,可通过他莫昔芬(Tam)诱导Cre的重组活性。在没有他莫昔芬的情况下,CreER融合蛋白与热休克蛋白90(HSP90)相互作用并存在于细胞质中。在给予他莫昔芬的情况下,他莫昔芬(Tam)作为抗雌激素药物会与雌激素受体ER结合,从而破...
雌激素诱导型Cre,即CreER系统,也叫他莫昔芬(Tam)诱导的Cre系统。将Cre与雌激素受体ER融合,可通过他莫昔芬(Tam)诱导Cre的重组活性。在没有他莫昔芬的情况下,CreER融合蛋白与热休克蛋白90(HSP90)相互作用并存在于细胞质中。在给予他莫昔芬的情况下,他莫昔芬(Tam)作为抗雌激素药物会与雌激素受体ER结合,从而破...
当给予Tam处理后，Tam在体内被转化为4-羟基他莫昔芬（4-OHT）。这种4-OHT与Cre-ER相互作用，导致Cre-ER从HSP90上解离，并进入细胞核（图2和3）。在细胞核内，Cre-ER能够特异性识别loxP位点（图4），从而实现对组织X中基因Y的敲除（图5）。值得注意的是，Cre-ERT2在体内对药物诱导的反应更为敏感，因此通常...
Cre-ER(Tam)系统，也称为他莫昔芬 (Tamoxifen)诱导的 Cre 系统，是 Cre-LoxP 系统中最为常用的一...