第一步交配，X基因Cre杂合小鼠（X基因Cre/+）与Y基因 floxed杂合小鼠（Y基因 lox/+，即CKO打靶Y基因...
产生Cre/lox肝脏组织特异性敲除的最高效的育种方案如下:首先如图1,为了产生杂合子的floxed等位基因和半合子的Alb-cre转基因小鼠品系,将感兴趣的纯合子floxed小鼠与Alb-cre转基因小鼠株系交配。大约50%的后代为floxed等位基因杂合子,cre转基因为半合子(cre/+;flox/+)。 将这些小鼠与纯合子的floxed小鼠配对(见下...
flox cre小鼠基因型鉴定流程floxed cre 鼠标代表一种基因工程的菌株,其特征是有loxP站点侧绕特定基因或基因。 将这种肌肉模型基因化的目的是明确确认软体基因和cre rbinase基因的存在。 这种验证是研究人员不可或缺的先决条件,因为它直接影响到鼠标的phenotypic和行为特征。 基因分解程序要求从老鼠身上提取DNA,然后扩大...
如果表达的基因是GFP荧光或者LacZ等显色基因,常常作为报告小鼠品系用来确认Cre的特异性。 02 Cre-Lox小鼠鉴定 我们以基因敲除为例,介绍Cre-Lox小鼠的相关鉴定。首先需要鉴定小鼠是否为目标基因型。cKO小鼠的目标基因型是Cre/+; flox/flox, 此时同时使用原始Cre品系和floxed品系的基因型鉴定方法即可。需要注意的是,如果...
因此,利用四环素诱导条件性基因敲除需要3种基因工程小鼠同时使用,才能最终获得flox纯合且Cre与rtTA(或tTA)双阳性的子代小鼠。总起来说,整个系统较为复杂,繁育及基因型鉴定工作量都比较大。 2干扰素诱导型 Mx1-Cre 干扰素诱导是通过Mx1基因启动子对于干扰素的响应来实现的。Mx1-Cre 小鼠在一般状态下不表达Cre重组酶,...
The results of PCR amplification and sequencing allow us to determine accurately the flox cre genotype of mice. 接下来,我们要用一些特定的引物和合成的克隆DNA来帮助我们对PCR扩增出来的DNA片段进行鉴定。通过这个方法,我们可以确定小鼠身上是否含有flox和cre基因的特定片段。我们还会用测序技术来核实鉴定出来的...
Cre鼠常用于与flox鼠杂交进行条件性基因敲除,也有研究将其用于切割位于报告基因前的终止序列,以达到荧光标记特定细胞的目的。改造并优化Cre,结合细胞/组织特异性的调控元件,可实现时空条件性靶基因敲除/表达。 模型验证——以Cx3cr1-iCre小鼠为例 将Cx3cr1-iCre小鼠与Rosa26-LSL-tdTomato小鼠交配,产生双基因杂合...
例如:敲除小鼠胚胎发育过程中必需的基因Pten会导致胚胎死亡,而使用条件性基因编辑在成年小鼠的特定组织中敲除Pten,可以研究其在肿瘤发生中的作用(Groszer, M., 2001)[2]。 2)减少非特异性效应 全身性敲除一个基因可能会引起广泛的生理变化,掩盖了研究目标基因在特定组织或细胞类型中的功能。条件性基因编辑可以在特定...
tetO-Cre与rtTA小鼠联用，在给予Dox的情况下敲除目的基因 所以，利用四环素诱导条件性基因敲除需要3种基因工程小鼠同时使用，相互交配才能最终获得flox纯合且Cre与rtTA（或tTA）双阳性的子代小鼠。整个系统较为复杂，繁育及基因型鉴定工作量都比较大。干扰素诱导型Mx1-Cre 干扰素诱导是通过Mx1基因启动子对于干扰素的响应...
CRE小鼠和flox小鼠是两种常用的实验动物模型。CRE小鼠是一种转基因小鼠模型，它携带着一种特定的转基因CRE重组酶基因。CRE重组酶是一种酶，它能够识别和切割DNA上的特定序列，进而触发基因的重组。研究人员通过使用CRE小鼠和其他携带了CRE识别序列的转基因小鼠，可以实现特定基因在特定组织或时间点的剔除或...