Cre重组酶能有效地删除两个LoxP位点间的序列(Deletion)(图1A);② 如果两个LoxP位点位于一条DNA链上但方向相反,Cre重组酶能诱导两个LoxP位点间的序列翻转(Inversion)(图1B);③如果两个LoxP位点分别位于两条不同的DNA链或染色体上,Cre重组酶能诱导两条DNA链发生交换或染色体易位,即基因...
但是突变的LoxP序列必须和同样突变的LoxP序列匹配介导基因重组,而不能和未突变的LoxP序列匹配,这样将不同的LoxP序列组合用于控制多个基因(DIO/DO系统中的Lox2272位点),在同一Cre重组酶的作用下,可以实现多序列的基因重组,产生非常多元的重组结果。
Cre与LoxP一起组成Cre-LoxP系统,从而实现在时间和组织上的基因调控表达。 根据国际小鼠表型项目联盟(IMPC)统计,超过30%的小鼠基因敲除后胚胎致死或出生后不久死亡。而Cre-loxP系统的建立,不仅可以用于具有胚胎致死性目的基因的研究,还为实现大小鼠条件性靶基因功能研究,提供了有效工具。 LoxP位点的重组效率低,容易重组...
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什么是Cre/LoxP Cre/LoxP是一种常用的位点特异性的重组系统,可以用于原核生物和真核生物的基因组编辑,主要由两大组分组成:Cre重组酶(Cre recombinase)和一段叫做LoxP 位点的DNA 序列。Cre 重组酶是噬菌体P1编码的38kDd的蛋白,可以识别loxP上的两段13bp长的重组结合元件(recomb...
Cre重组酶,作为基因工程领域的关键工具,通过识别和催化lox位点间的DNA重组,实现了基因的精准定位和调控。lox位点,以其独特的13bp回文序列,分为识别序列和重组区域,为Cre提供了定位的锚点。Cre系统在小鼠体内展现了卓越的基因打靶能力,包括条件性基因表达与敲除,其核心在于Cre切除终止盒和同向Lox位点...
The Cre-loxP System 1. a brief intro to Cre-loxP system 是源于P1噬菌体的高效重组系统。Cre即为“重组酶”的缩写,loxP即Cre可以识别的DNA序列。其核心序列决定了loxP的方向,在Cre识别时,不同的方向会造成不同的重组效果。loxP在自然界中很难找到一样的序列,在实验动物中不容易让Cre识别别的DNA片段。
1、Cre-LSL策略 该策略是将转录终止信号盒(STOP)置于启动子与目的基因之间,转录终止信号盒两端各有一个同向的LoxP位点,组成promoter-LoxP-STOP-LoxP-gene模式,即LSL序列。在无Cre存在的细胞中,转录终止信号盒下游靶基因完全不表达,但在Cre存在的条件下,基因重组中的Deletion过程发生,移除转录终止信号盒,进而...
Cre-loxP系统的核心在于Cre酶,它结合LoxP位点进行重组。Cre是一种38kDa的多肽,能识别LoxP序列并促使两个LoxP位点间发生重组,形成LSL、DIO/DO和MADM等策略,控制基因的表达条件。例如,LSL通过Cre酶的诱导,可实现基因的条件性表达,DIO和DO则通过Lox位点的双轮重组控制基因表达的开启和关闭。在实际应用...