COIP-MS技术主要利用抗体特异性识别目标蛋白,通过免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation, COIP)的方法捕获目标蛋白及其相互作用的蛋白质复合物。随后,利用质谱(Mass Spectrometry, MS)技术对共沉淀的蛋白质复合物进行鉴定和分析,从而实现蛋白质相互作用网络的构建。 ### 实验步骤 1. **样品
CoIP实验流程方法及质控，免疫共沉淀 本次实验的目的是使用CoIP-MS或者CoIP-WB的方法，通过在目的细胞中运用针对目标蛋白的抗体把相应的蛋白-蛋白复合物沉淀下来，经过分离纯化并对结合在复合物上的蛋白进行MS或WB分析寻找目标蛋白相互作用的蛋白，或在不同遗传背景或处理条件下的互作变化。CoIP实验方法步骤详解：一、...
COIP-MS作为一种结合了交联技术和质谱分析的方法，具有以下几个显著的优势：1.高分辨率 COIP-MS技术能够提供高分辨率的质谱数据，可以准确地鉴定蛋白质的交联位点和交联桥。这使得研究人员能够更加准确地了解蛋白质的互作模式和结构。2.高灵敏度 COIP-MS技术具有高灵敏度，可以检测到低浓度的蛋白质交联产物。这使得研...
AP-MS无需使用抗体,而是通过将标签(如Strep标签、FLAG标签等)与诱饵蛋白进行融合表达。融合表达的诱饵蛋白及其相互作用蛋白可通过链霉亲和素(Strep)磁珠等特异性亲和介质进行纯化。随后,将实验组与对照组的样品分别进行质谱分析,并通过比对两组蛋白质谱数据的差异,即可准确鉴定出与诱饵蛋白相互作用的蛋白质。这种方法...
CoIP-MS即为将免疫共沉淀和蛋白质谱技术串联,运用LC-MS/MS技术对Co-IP所捕获的蛋白产物进行鉴定分析的技术。相比于MALDI-TOF, LC-MS/MS方法具有更高的灵敏度和几乎100%的可靠性,是主流文献中最常用的方法。在对样本进行非变性条件的蛋白提取之后,Co-IP所获产物进行SDS-PAGE分离不同大小的蛋白,蛋白质还原烷基化...
b) 通过质谱筛选某个已知蛋白可能结合蛋白（体内实验）常规思路：通过组学或其他手段确定某个功能相关蛋白，进一步筛选确定该蛋白作用机理，则可以选择CoIP-MS.文献中：通过CoIP-MS实验筛选到差异蛋白vimentin，CoIP-WB和GSTpull-down等方法进一步确定P62与vimentin互作。From：p62/SQSTM1interacts with vimentin toenhance ...
CoIP-MS即免疫共沉淀与质谱技术联用，可以用质谱鉴定这个蛋白复合物中的其他成员，高效筛选鉴定未知互作蛋白。运用LC-MS/MS技术对Co-IP所捕获的蛋白产物进行鉴定分析，LC-MS/MS方法具有更高的灵敏度和几乎100%的可靠性，是主流文献中最常用的方法。服务特色 免疫共沉淀及质谱一体化操作，一站式解决免疫沉淀及后续...
孵育后,您需要收集抗体-蛋白质复合物。 根据您使用的方法,您将使用磁铁或离心将复合物与其他细胞蛋白分离。 6.洗珠子 既然您的目标蛋白有望通过您的抗体束缚在您的微珠上,那么是时候摆脱裂解物中的所有其他物质了。 清洗抗体-珠子复合物几次,以清除未与抗体特异性结合的细胞物质。 洗涤还有助于减少“粘性”细胞...
由于CoIP-MS技术对蛋白质相互作用的鉴定依赖于抗体的质量和特异性,因此在实际应用中需要进行多次重复实验来验证结果的可靠性。 2. 数据解析 CoIP-MS生成的数据量庞大,需要借助生物信息学和统计学的方法来进行数据解析和筛选,因此在数据分析的过程中存在一定的复杂性和技术门槛。 四、个人理解和看法 对于CoIP-MS技术,...
【干货分享】免疫共沉淀CoIP实验详细方法步骤 本次实验的目的是使用CoIP-MS或者CoIP-WB的方法,通过在目的细胞中运用针对目标蛋白的抗体把相应的蛋白-蛋白复合物沉淀下来,经过分离纯化并对结合在复合物上的蛋白进行MS或WB分析寻找目标蛋白相互作用的蛋白,或在不同遗传背景或处理条件下的互作变化。 广州基云生物拥有经验丰...