如果IgG组和IP组无杂带，Input有杂带，可能由于WB抗体的特异性不够好，实际实验中可能考虑的因素可能要更多。4、IP和IgG组均无条带 可能由于IP抗体加入的量少，ip抗体特异性差，或者蛋白量过高，优先覆盖住beads，导致IP抗体和Beads的集合较少等，可以优先通过增加抗体用量和优化结合顺序入手，实在没
IgG:Anti-A的同型对照抗体,即跟Anti-A同来源同种型,如Anti-A是兔来源IgG型,则同型对照抗体需要选择Rabbit IgG(abs20035)。 结果图解析: 该结果是为验证蛋白A与蛋白B是否存在相互作用。本实验一共分为两大组:Input组及IP组,其中IP组又分为IgG组(阴性对照组)和实验组,并通过WB去验证蛋白A和B在每一个组里...
IgG:Anti-A的同型对照抗体,即跟Anti-A同来源同种型,如Anti-A是兔来源IgG型,则同型对照抗体需要选择Rabbit IgG(abs20035)。 结果图解析: 该结果是为验证蛋白A与蛋白B是否存在相互作用。本实验一共分为两大组:Input组及IP组,其中IP组又分为IgG组(阴性对照组)和实验组,并通过WB去验证蛋白A和B在每一个组里...
Anti-A：A蛋白的免疫共沉淀抗体 IgG：Anti-A的同型对照抗体，即跟Anti-A同来源同种型，如Anti-A是兔来源IgG型，则同型对照抗体需要选择Rabbit IgG（abs20035）结果图解析：该结果是为验证蛋白A与蛋白B是否存在相互作用。本实验一共分为两大组：Input组及IP组，其中IP组又分为IgG组（阴性对照组）和实验组，...
更适用于诱饵蛋白表达量低或者没有IP抗体的情况;第二种是选择IP抗体的对照IgG抗体,这种方式下,诱饵蛋白的表达处于天然状态,更接近真实情况,但是相应的可能出现表达量低,成功率不高的情况,同时需要IP级别的抗体;第三种就是用敲除诱饵蛋白的细胞作对照样本,这种情况下,实验组也是在天然条件下,可信度高,但是实验所需...
那IgG和IP的上样量相应有要求吗？ 答：通常上样量50ug/100ug。7、免疫共沉淀如何避免假阳性？答： Co-IP选择抗体尤为关键，特异性抗体可以排除非特异性结合进而排除假阳性。同时可以结合Co-IP反向验证进一步排除假阳性。若抗体浓度过高，则降低抗体浓度；若抗体特异性不好，则更换抗体。8、质谱结果几百个怎么分析...
Anti-A:A蛋白的免疫共沉淀抗体 IgG:Anti-A的同型对照抗体,即跟Anti-A同种属来源,如Anti-A是鼠源IgG型,则同型对照抗体需要选择Mouse IgG 目前我们常用以下几种分组方式: 1、内源性CO-IP检测 上面示意图分为两大部分:IP部分和Input部分。 首先看Input部分,通过分别检测蛋白A和蛋白B表达水平,我们可以确认: ...
2)第二种是选择IP抗体的对照IgG抗体,这种方式下,诱饵蛋白的表达处于天然状态,更接近真实情况,但是相应的可能出现表达量低,成功率不高的情况,同时需要IP级别的抗体; 3)第三种就是用敲除诱饵蛋白的细胞作对照样本,这种情况下,实验组也是在天然条件下,可信度高,但是实验所需的周期较高,要进行敲除验证。
4.IP样本中加入2~5ug目的抗体（具体根据抗体说明而定），IgG样本中加入2ul IgG抗体4℃旋转孵育过夜；5.IP及IgG样品分别加入40ul IP05，4℃垂直混匀器摇动孵育过夜；（IP05需预先用400ul PBST洗涤3遍）6.4℃,4000rpm 离心1min,除去上清;7.用400ul PBST洗涤5次，每次4℃摇动洗涤3min，4℃,4000rpm 离心 ...