一、细胞的收集及裂解 收集2E7个细胞样品，加入PBS洗涤细胞，离心后弃上清收集细胞沉淀。准备500 μl 预冷的 Cell Lysis Buffer,分别加入5 μl Protease Inhibitor、5 μl PMSF，混匀后加进细胞沉淀中吹打均匀，冰上孵育 30 min，期间涡旋混匀几次。4℃,12000 rpm 离心10 min，取上清，进行蛋白浓度测定及后续...
一实验方法 1.1细胞裂解液的获取 1、将细胞培养至状态良好，吸除培养基，加5ml PBS，左右晃动，清洗细胞一次 2、加入1ml 胰酶消化，消化完全后，加2ml完全培养基终止消化。3、1200rpm，离心1min，去上清。4、每1x107个细胞加入500µl的RIPA裂解液。5、每ml RIPA裂解液加10µl的PMSF以及磷酸酶抑制剂和...
3.实验步骤 （1）总蛋白提取：样本中加入蛋白提取液200uL；上蛋白质能研磨仪，低温研磨2min；4℃,12000rpm，离心15min,收集上清，上清BCA蛋白定量法测定蛋白浓度为9.825mg/ml，约180uL。（2）取10uL全蛋白，作为input以备Western blot分析，剩余样本加入1μg相应的抗体，4℃摇床孵育过夜；（3）取10μL protei...
COIP实验方法及检测报告模板 一、实验目的:通过免疫共沉淀的方式:用AGO2抗体共沉淀样本中AGO2蛋白及与其互作的蛋白;然后通过WB验证AGO2与CDK1是否存在相互作用。 二、实验材料 l主要试剂 l主要仪器及器材 三、实验步骤 1.蛋白样品制备: a.收集10^7个细胞至 1.5 mL EP 管内,并用预冷 1×PBS洗涤两次; b.加...
发文高分利器,COIP实验方法 #实验方法 #sci实验 #实验发文 #sci发文 #科研 - SCI 科研助手于20240826发布在抖音,已经收获了8.3万个喜欢,来抖音,记录美好生活!
Question:COIP实验步骤中,去除杂蛋白的具体方法是什么?(普拉特泽生物提供长期稳定的细胞实验外包服务) 答:在CO-IP(免疫共沉淀)实验步骤中,去除杂蛋白的具体方法主要是通过使用Protein A agarose(或Protein A/G agarose)微球来实现的。 以下是详细的步骤和解释: ...
竟然我们在体内验证过,那么蛋白X和蛋白Y在体外是否也存在相互作用了?这个时候我们可以用到CoIP了~ 免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation,Co-IP)的原理和IP是一样的,当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质相互作用被保留了下来,假如细胞内存在 XY 蛋白复合物,用 X(X也称为诱饵蛋白)的抗体...
CoIP,Co-Immunoprecipitation,利用Protein A/G的琼脂糖微珠或磁珠(Protein A/G能特异性结合免疫球蛋白),将诱饵蛋白的抗体固定,然后通过这个抗体固定诱饵蛋白。当与诱饵蛋白有相互作用的靶标蛋白与这个复合物混合时,会被吸附而“沉淀”下来。 🔍 实验方法的异同 🔍 GST pull-down和CoIP实验都使用多组分的固相复合...
是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。 2、 实验流程 3、 样品要求 1) 动物组织样品：>100mg (黄豆粒大小)2) 细胞样品:>4*107 3) 植物组织>5g 4、 注意事项 客户需要提供物种信息及基因信息,及IP级别抗体。组织样品需液氮速冻、保存于-80度。样品用干冰寄送。
Co-IP免疫共沉淀常见问题及解决方法: 一、实验结果高背景 原因1:制备样品中可能有不完全溶解的大的蛋白复合体 制备样品后进行短暂超声处理(3次,每次5秒钟),然后离心纯化,取上清后进行后续实验 原因2:洗涤不彻底 多次洗涤,并逐渐增加洗涤缓冲液中的NaCl和去垢剂浓度 ...