免疫沉淀效果 极佳(由于亲和力高) 由抗体的亲和力决定(极佳或极弱) 极佳(由于选择可以成功进行IP且没有交叉反应的抗体组成单克隆抗体群) 免疫共沉淀效果 通常很好,但有时非特异性相互作用会带来假阳性 有抗体的亲和力决定和抗原表位是否被相互作用蛋白遮蔽决定(极佳或极弱) 极佳(由于选择可以成功进行IP且没有交叉反...
Input：全细胞裂解液，含有细胞内所有的蛋白，可认为是阳性组。也就是处理完样本得到的细胞裂解液，在做IP实验之前，需要先跑WB，确认样本中含有蛋白A和蛋白B。Anti-A：A蛋白的免疫共沉淀抗体 IgG：Anti-A的同型对照抗体，即跟Anti-A同来源同种型，如Anti-A是兔来源IgG型，则同型对照抗体需要选择Rabbit IgG（...
Co-IP抗体的选择 在进行Co-IP实验前,需要确认抗体可以用于Co-IP实验。在Co-IP实验中,抗体需要识别蛋白的构象表位,只能识别线性表位的抗体可能无法将靶蛋白沉淀出来,因此并不是所有的抗体都可以用于Co-IP实验。另外,用于IP靶蛋白的抗体与用于Weatern Blot检测目的蛋白的抗体最好是不同种属的,以避免抗体污染。(为什么...
多克隆抗体将在不同位置结合您的蛋白质,这意味着成功进行 Co-IP 的机会更大,并最大限度地减少潜在问题,例如您的抗体是否识别与您试图寻找的伴侣结合的位点。 如果不能选择多克隆抗体,请选择一种抗体,该抗体可识别您感兴趣的蛋白质上未被任何其他蛋白质-蛋白质相互作用掩盖的表位。 确保抗体与天然蛋白结合; 一些...
推荐先通过文献查阅或咨询供应商,选择已证实可用于Co-IP实验的抗体;如果无相关的抗体特异性数据,应先使用缺乏诱饵蛋白的细胞总蛋白作为阴性对照进行沉淀以确定该抗体无法沉淀任何非特异性蛋白,使用含有诱饵蛋白的蛋白溶液作为阳性对照确定该抗体可沉淀目的蛋白。此外,某些高质量抗体也可能出现非特异性结合,应使用与目标...
1.抗体选择：CO-IP需要特异性的抗体，而Pull Down需要选择合适的亲和标记。抗体的选择和亲和标记的引入都可能对蛋白质的结构和功能产生影响，需要谨慎考虑。2.操作复杂度：CO-IP操作相对复杂，需要多个步骤和较长的时间；而Pull Down操作相对简单，时间较短，适用于高通量实验。3.结果解读：CO-IP可以保留蛋白质的...
推荐先通过文献查阅或咨询供应商,选择已证实可用于Co-IP实验的抗体;如果无相关的抗体特异性数据,应先使用缺乏诱饵蛋白的细胞总蛋白作为阴性对照进行沉淀以确定该抗体无法沉淀任何非特异性蛋白,使用含有诱饵蛋白的蛋白溶液作为阳性对照确定该抗体可沉淀目的蛋白。此外,某些高质量抗体也可能出现非特异性结合,应使用与目标...
另外,Co-IP实验还需要设置一个阳性对照组(Input组),即直接利用抗体X/Y对细胞裂解液进行WB检测,验证细胞裂解液中蛋白X/Y的存在。 以Hsp70和Apaf-1为例 3.2 Co-IP抗体的选择 选对抗体是我们实验成功的关键所在。在进行Co-IP实验前,我们需要确认抗体可以用于Co-IP实验。因为在Co-IP实验中,抗体需要识别蛋白的构象...
过表达提高目的蛋白的含量:选择目的蛋白或相互作用蛋白含量高的样品进行免疫共沉淀实验。 九、免疫共沉淀与免疫沉淀的区别 免疫沉淀(immunoprecipitation)是指利用抗体可与抗原特异性结合的特性,将抗原(常为靶蛋白)从混合体系沉淀下来,初步分离靶蛋白的一种方法。
2.Co-IP实验的步骤 2.1抗体选择：选择特异性和高亲和力的抗体，能够与目标蛋白质结合并稳定形成复合物。抗体的选择是Co-IP实验成功的关键。2.2细胞裂解：将目标蛋白质所在的细胞或组织进行裂解，释放出蛋白质复合物。在裂解过程中，需要加入适当的缓冲液和蛋白酶抑制剂以保持蛋白质的完整性。2.3免疫反应：将抗体...