结果显示，Iuput组中均检测到了BRD9和FOXP1，表明样本存在这两种蛋白；IP组中的IgG组未显示条带，排除非特异性结合的可能，而anti-FOXP1组在BRD9和FOXP1的条带位置中均显示，即沉淀复合物中存在这两种蛋白，证明BRD9和FOXP1之间存在相互作用。案例二：（目的蛋白融合标签进行Co-IP验证）图3 UHRF2和PRDX1之间存...
在co-ip-ms实验中，IgG对照是一种重要的实验对照。它可以帮助我们评估非特异性结合程度，确定特异性相互作用，并提高实验结果的可靠性。通过合理设计实验方案，引入IgG对照，我们可以更好地理解蛋白质间的相互作用关系，为生物药物研究提供有力的支持。
如果是Flag-A和HA-B两个质粒共转染,也可以用Input-IgG-IP形式来设计实验和展示结果。就是先正向用Flag抗体和IgG抗体做co-IP,WB跑Flag和HA,然后反向用HA抗体和IgG抗体做co-IP,然后WB跑Flag和HA。 (2)不含IgG对照组的形式: 单质粒转染的Co-IP(内源性蛋白A的抗体拉外源性标签蛋白B): 案例如下:转染HA-Ub...
用于蛋白纯化，如利用含有Protein G的beads可以结合含有IgG的Co-IP复合物。
IP/Co-IP实验中IgG阴性对照的意义是什么? 排除非特异性结合的可能性,例如检测一个兔子细胞的某种蛋白质,若没有设置IgG的对照,而操作中有非特异性蛋白质,又和设计的抗体有作用,就会出现阳性的结果。如果做了lgG阴性对照,对照没有出现阳性就说明没有非特异性的蛋白,对照出现阳性,说明抗体有非特异结合到杂蛋白的...
非特异性结合，IgG是阴性对照，就是为了排除，你的目的蛋白和抗体是非特异性结合
IP：全称immunoprecipitation，即免疫沉淀，这一步主要是为了纯化富集目的蛋白。Input：全细胞裂解液，含有细胞内所有的蛋白，可认为是阳性组。也就是处理完样本得到的细胞裂解液，在做IP实验之前，需要先跑WB，确认样本中含有蛋白A和蛋白B。Anti-A：A蛋白的免疫共沉淀抗体 IgG：Anti-A的同型对照抗体，即跟Anti-A同...
非特异性结合吧
1、内源性CO-IP检测 上面示意图分为两大部分:IP部分和Input部分。 首先看Input部分,通过分别检测蛋白A和蛋白B表达水平,我们可以确认: 1组(IgG组)和2组(Anti-A组)中蛋白A、蛋白B均有表达,并且表达量一致,排除了因部分组别部分蛋白表达缺失、不同组蛋白表达量差异化大等原因造成的假阴性或者假阳性。
如何避免免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation,Co-IP)中的igG交叉反应赵晋平jinpingzhao@sina蛋白质相互作用技术已经为越来越多的研究者所应用,其中免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation,Co-IP)作为一种最受认可的蛋白质相互作用方法,且结果被最为广泛的杂志和审稿者所接受。在权威的国际杂志中甚至被要求作为必须和唯一的可靠...