由于IP的抗体用量非常大(1ug),就导致55KD处的信号会非常强。如果你用抗兔的二抗进行显色,那么55KD处的ip抗体的重链和你的目的蛋白会重叠在一起,无法分辨。 然而这个时候如果你的目的蛋白进行WB的抗体不是兔抗的,比如小鼠抗的,那么就需要用抗小鼠的二抗...
1ul。根据查询丁香园论坛得知，coip抗体1ul抗体对应1mg蛋白，所以一定要定量，才能确定IP时加入抗体的量。
说明书（CO-IP26149）Pierce免疫共沉淀（Co-IP）试剂盒 26149 2181.6 描述26149 Pierce 免疫共沉淀（Co-IP）试剂盒，包含⾜够进⾏ 50 次免疫沉淀反应的试剂（每次使⽤ 25ul 树脂固相化抗体）试剂盒组分：加强型AminoLink偶联树脂，2 mL 固相树脂以50%的浆液形式提供（例如，100ul 50%的浆液含有50ul固相...
本操作流程可以根据需要按比例调整;参见―重要产品信息‖的表1 中抗体和树脂的建议用量。 1将加强型AminoLink偶联树脂和试剂平衡至室温。 2用超纯水稀释20交联缓冲液至1,每个IP反应准备2 毫升1×交联缓冲液。 3轻旋加强型AminoLink偶联树脂的瓶子,以获得均一的悬浮液。使用大口径或截短枪头将50ul树脂浆液加入...
TrueBlot®蛋白A磁珠IP/Co IP试剂盒可实现高效免疫沉淀(IP)以及使用少量抗体(通常为1-10µg)对抗原进行共免疫沉淀(co-IP)。 Trueblot®磁珠的硬度大约高出1.5到3倍与竞…
本操作流程可以根据需要按比例调整;参见―重要产品信息‖的表1中抗体和树脂的建议用量。 1将加强型AminoLink偶联树脂和试剂平衡至室温。 2用超纯水稀释20交联缓冲液至1,每个IP反应准备2毫升1×交联缓冲液。 3轻旋加强型AminoLink偶联树脂的瓶子,以获得均一的悬浮液。使用大口径或截短枪头将50ul树脂浆液加入Pierce...
内源性 Co-IP 实验可选择蛋白 A/G 磁珠或蛋白 A/G 琼脂糖;外源性 Co-IP 实验中蛋白携带标签 (如 Flag、HA、c-Myc、GST 等),可以选择标签抗体类磁珠/琼脂糖凝胶珠 (如 Anti-Flag 磁珠、Anti-HA 磁珠、Anti-c-Myc 磁珠、Anti-GST 磁珠等),可一定程度增强丰度,减少 IgG 干扰。
IP样本一般建议新鲜制备并立即使用,如有需要可保存在-80 ℃。 2)预纯化 阴性对照的选择: 与IP抗体同源同型(亚型)的抗体:如 Rabbit IgG;Mouse IgG1, etc; 取与IP实验等量的裂解液,使用Isotype Control孵育;与IP抗体孵育同时进行。 Isotype Control选择: ...
IP(Immunoprecipitation),免疫沉淀:是利用固定在磁珠或琼脂糖树脂等基质上的特异性抗体对抗原进行小型亲和纯化的一种方法 Co-IP(co-Immunoprecipitation),免疫共沉淀:co-IP 是一种常用的鉴定蛋白-蛋白相互作用的方法,其基本实验流程和 IP 类似,通过使用诱饵蛋白(IP 中的抗原,bait protein)特异性抗体间接捕获与其结合的...