干货分享 | CO-IP免疫共沉淀实验操作详细步骤 1、预冷PBS、RIPA Buffer、细胞刮子(用保鲜膜包好后,埋冰下),离心机 2、用预冷的PBS洗涤细胞两次,最后一次吸干PBS 3、加入预冷的RIPA Buffer(1mL/107个细胞、10cm培养皿或150cm²培养瓶、0.5mL/5x106个细胞、6cm培养皿、75cm²培养瓶) 4、用预冷的细胞...
细胞免疫共沉淀实验(Co-IP)是一种研究细胞内蛋白质相互作用的重要方法。其基本原理是,如果细胞内两种蛋白质(A和B)有直接或间接的相互作用,那么在温和的裂解条件下获得的蛋白样品中加入A蛋白的抗体,可以将A蛋白沉淀下来,与其直接或间接相互作用的B蛋白或C蛋白也会一起被沉淀下来。通过Western blot检测沉淀中是否存在...
IP/Co-IP 操作方法 1. 用冰冷的PBS缓冲液洗涤两次在组织培养盘或瓶內贴壁的细胞，之后排掉PBS。并且也用PBS洗涤非贴壁细胞，接着在桌面型离心机中，用转速800 - 1000转/分钟去离心5分钟，以沉淀细胞。2. 添加冰冷的RIPA改良缓冲液至细胞（加1毫升至每10 7个细胞/100 mm组织培养盘/150平方厘米组织培养盘瓶...
一、蛋白样品制备 裂解提取出免疫沉淀需要的蛋白样品,以下为HEK293T细胞样品的处理方法,其余的样品制备方法参阅相关文献。 单层贴壁细胞总蛋白的提取: 1、收集细胞:10cm细胞培养板上,每板细胞加1ml ,4℃预冷的PBS(0.01 M pH7.2～7.3)。反复冲洗把所有挂壁细胞洗下来转移到1.5ml离心管内 离心:3400 rpm 2min。
免疫共沉淀Co-IP实验操作步骤 一、原理：免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。其原理是：当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质－蛋白质间的相互作用被保留了下来...
根据IP实验结果,可以调整每次IP的总蛋白用量。 预纯化流程: 取200 μL 1 mg/mL的细胞裂解物与30μL 50%的PreteinA/G微珠(琼脂糖或磁珠)混合,4 ℃孵育30-60min; 通过离心或者磁性分离去除微珠; 留取上清进行后续实验。 3、共孵育(抗体+蛋白)
免疫共沉淀结果表明在正常人甲状腺上皮细胞系中,CXCR3与Beclin1存在相互作用。 案例解读2 ①分子量大小 ②不同的细胞系名称 ③内参蛋白:验证实验条件、排除非特异性结合,并作为实验重复性和准确性的内部对照 ④WCL:全细胞裂解液 ⑤实验组免疫共沉淀的蛋白样品 ...
免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)是一种利用抗原与抗体之间的专一性为基础,广泛应用于研究蛋白质与蛋白质相互作用的经典研究方法。 原理 其原理是如果细胞内两蛋白(A、B)有直接或间接的相互作用时,那么在温和的裂解条件下获得的蛋白样品中加入 A 蛋白的...
在研究蛋白相互作用时，免疫共沉淀（Co-IP）是常用方法之一，其优势在于鉴定的蛋白-蛋白互作在细胞内发生，更接近天然状态，从而提高可信度。相比普通Co-IP，Co-IP MS 则结合了质谱技术，用于鉴定互作蛋白。在进行Co-IP和Co-IP MS过程中，常遇到的挑战及应对策略如下：充足的样本量是免疫共沉淀的关键...
第三组(只表达STING-HA的293T细胞)在37kD处有条带,这说明细胞中含有HA标记的STING(因为STING的分子量大概是35kD); 第四组(共同表达STING-HA与与NLRP14-FL的293T细胞)在110kD处有条带,在37kD处也有条带,这说明这种细胞中含有NLRP14与STING。 从上面的图片可以知道,在做Co-IP实验时,需要设立阳性对照组来...