因此,熟悉了解免疫共沉淀实验的原理及操作流程是进行Co-IP结果图分析的关键。 文献案例1 该图为验证蛋白EDR1与蛋白EDR4之间是否存在相互作用的结果图。 由图中可以得到:蛋白EDR4带有GDP标签,蛋白EDR1带有FLAG标签,该实验为利用蛋白标签来沉淀和检测蛋白。 该Co-IP实验实验被分为两组,第一组存在GFP标签及EDR1-FLA...
图1A的IP组结果显示,在第三组沉淀复合物样本中均检测到了Myc和Flag,表明protein A和protein B之间存在相互作用;图1B IP组的第三组样本中只有Flag,而没有检测到Myc,代表protein A和protein B之间不存在相互作用。 文献案例分析 了解Co-IP结果图一般含义后,我们再结合文献案例实战分析Co-IP的结果。(案例均引自汉...
说到Co-IP(免疫共沉淀)实验原理,就不得不提到IP(免疫沉淀)了:IP是利用固定在磁珠或琼脂糖树脂等固相支持物上的特异性抗体对抗原进行亲和纯化的方法。基本原理是抗原-抗体特异性结合,检测目的是富集分离蛋白。 Co-IP是IP的延伸,主要是用于探测两个蛋白分子间是否存在特异性相互作用的一种方法。其原理是如果两个蛋...
接着，IP组中的各组分别用含Flag抗体的磁珠和含His抗体的磁珠去拉沉淀复合物，WB再检测Flag和His。IP: Flag结果显示，前两组中His均能检测到明显的条带，表明LRP6和CTSD之间存在相互作用，LRP6的P1427Q突变并不影响二者的互作；LRP6（P1427Q）和CTSD WT共转组、LRP6 WT和CTSD（G316R）共转组的His明显下降，...
1.Co-IP的定义&用途 2.Co-IP解读案例1 3.Co-IP解读案例2 4.Co-IP解读案例3 01 Co-IP的定义&用途 定义 免疫共沉淀技术是一种研究两种蛋白在体内是否存在相互作用的有效方法,通过抗体和已知蛋白结合,从而捕获整个已知蛋白复合物,进而研究复合物中与已知蛋白存在相互作用的蛋白。
对结果进行分析之前,还需要了解图中的标注都是什么含义: IP:即指免疫沉淀(immunoprecipitation),用相应的抗体来纯化富集目的蛋白,例如图中“IP: Flag”的意思是用Flag标签抗体磁珠去拉Flag,与Flag融合表达的蛋白为诱饵蛋白,此时与该融合蛋白相互作用的其他蛋白都会因此被沉淀下来。
基本情况了解后，开始进行具体的分析：首先观察Input组，第一块胶图是利用α-GFP检测GFP标签，利用α-FLAG检测FLAG标签。结果显示第一泳道GFP标签空载体、Protein A-GFP和Protein B-FLAG均能正常显现，排除了假阳性结果的干扰且所有蛋白正常表达。随后观察IP（α-GFP）组，阴性对照组为利用GFP标签抗体磁珠对GFP标签空...
1.Co-IP的定义&用途 2.Co-IP解读案例1 3.Co-IP解读案例2 4.Co-IP解读案例3 01 Co-IP的定义&用途 定义 免疫共沉淀技术是一种研究两种蛋白在体内是否存在相互作用的有效方法,通过抗体和已知蛋白结合,从而捕获整个已知蛋白复合物,进而研究复合物中与已知蛋白存在相互作用的蛋白。
由于BiFC系统无法避免自激活荧光，因此，作者进行了Co-IP分析来进一步验证。结果表明AtMPC1可以与AtMPC2或AtMPC3互作形成复合物（图6）。图6 用Co-IP检测AtMPC1与AtMPC2或AtMPC3在体内的相互作用(He et al., 2019)。用FLAG抗体检测FLAG::AtMPC1，用C-MYC抗体检测C-MYC::AtMPC2和C-MYC::AtMPC3。IB：免疫印迹...
IP:指的是磁珠上挂的抗体。 IB:指的是 WB 用的抗体。 IgG:这个是阴性对照,磁珠里加的 IgG 不会拉到任何蛋白,所以是阴性对照。 案例分析 📈举个例子吧,有个实验是验证蛋白 EDR1 和蛋白 EDR4 之间是否存在相互作用。实验中,EDR4 带有 GDP 标签,EDR1 带有 FLAG 标签。实验分为两组:第一组有 GFP 标签...