当目的蛋白实在找不到合适的抗体时,可以尝试将GFP或FLAG等标签序列融合表达在目的蛋白的N端或是C端,构建表达载体转染细胞后表达出GFP或FLAG目的蛋白,然后采用抗GFP或FLAG的ChIP级抗体(或是GFP羊驼纳米抗体偶联的beads)免疫沉淀GFP或FLAG目的蛋白,从而间接实施了目的蛋白的ChIP实验。 ChIP级Flag/GFP单纯抗体 ChIP级Flag...
Illumina边合成,边测序 ChIP-seq测序中最为关键的Peak峰是如何生成的? ChIP-seq测序中最为关键的Peak峰的生成过程 ChIP-seq peaks are characterized by a local enrichment of ChIP-seq reads compared to control, and are observed over the binding sites for the TF under investigation. ChIP-seq reads are...
CHIP-Seq protocolSiegel, Nicolai
ChIP protocol实验室成熟的CHIP-seq及CHIP-qPCR操作流程Fixation type: Type I: 1%formaldehyde/PBS(100ml):36.5%formaldehyde (F8775-500ml)2.5mldiluted in1XPBS88.75ml Roomtemperature, 15min Type II: 2-5mMDSG(stock 50mM: 10mg in 540ulof dry DMSO),Roomtemperature, 45min 1% formaldehyde /PBS,Room...
ChIP-Seq Protocol I.Sonication via Diagenode sonicator EnsureDiagenode Chilleris filled with dH20. Turn sonicator on and set chillerto 4C. Resuspend 1protease inhibitor cocktail(PIC)tablet in 1ml of ultrapurewater to obtain a 50X concentrate.PICis stable for 1 day but can beused up to 1 ...
MPB | 高效的药用植物穿心莲组蛋白ChIP-seq的建库方法 2023年6月,中国科学院庐山植物园黄铭坤与中国中医科学院中药研究所孙伟团队以共同通讯在Medicinal Plant Biology上发表了题为Establishment of a convenient ChIP-seq protocol for identification of the histone modification regions in the medicinal plant ...
• ChIP-Seq 要求超声后的片段大小在200-600 bp 之间; • ChIP-qPCR 要求超声后的片段大小在300-1000 bp 之间; Option A:超声随机打断法 收集上一步骤Step 2中的细胞裂解液或组织匀浆液,直接进行如下超声打断流程。 A、非接触式全自动超声波破碎仪,高功率,30秒+30秒,超声28 cycles。或接触式超声仪230W...
ChIP protocol实验室成熟的CHIP-seq及CHIP-qPCR操作流程.doc,ChIP protocol Fixation type: Type I: 1% formaldehyde /PBS(100ml): 36.5%formaldehyde (F8775-500ml) 2.5ml diluted in 1XPBS 88.75 ml Room temperature, 15min Type II: 2-5mM DSG (stock 50mM: 10mg in 540
荧光定量PCR实验Protocol 标记适当数量、兼容待用 PCR 仪型号的 PCR 管或 PCR 板。PCR 反应应当包括靶蛋白抗体Anti-target IP样品、阴性对照 Normal Mouse/Rabbit IgG样品、监控 DNA 污染的不含 DNA 模板的空白对照和1% 输入对照Input组染色质 DNA 的连续稀释物(未稀释、1:5、1:25、1:125),以生成标准曲线并...
荧光定量PCR实验Protocol 标记适当数量、兼容待用 PCR 仪型号的 PCR 管或 PCR 板。PCR 反应应当包括靶蛋白抗体Anti-target IP样品、阴性对照 Normal Mouse/Rabbit IgG样品、监控 DNA 污染的不含 DNA 模板的空白对照和 1% 输入对照Input组染色质 DNA 的连续稀释物(未稀释、1:5、1:25、1:125),以生成标准曲线并...