实时荧光定量PCR技术(Real-timeQuantitativePCR,qPCR)是指在PCR反应体系中加入可与DNA产物特异性结合的荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最终通过相对定量(与内参基因对比)或绝对定量(通过标准曲线对未知模板进行定量)的方法确定各个样本的本底表达量。 3 3种荧光试剂的工作原理及区别 SYBRGreenⅠ法: 嵌入到...
ChIP Spike-in指的是在一个ChIP实验中，在纯化富集得到的目的DNA片段混合液中掺入一定量的已知序列外源DNA片段（最常用的就是lambda噬菌体的DNA）用于整个实验的质控及标准化，后续的荧光定量PCR可以检测Spike-in，得到的Ct值可以作为内参对目的Ct值进行标准化处理。也可以用在下游的二代测序中。关于spike-in的来龙...
从结果里看，SN1是没富集的，跟actin一样都是作为阴参；佐证自己验证基因的可信性。
如果想研究的是一个组蛋白修饰,那么需要找一个在实验组和对照组中都有该修饰且修饰表达量不受影响的基因当作ChIP qpcr的对照。用来说明目的基因测出来的变化是有意义的。如下图所示的CK就是一个负对照基因。(类似于基因定量中的actin 功能)文章中的描述为 Anti-H3 was used as an internal reference for ChIP ...
[EMSA/Ch ] 关于CHIP-qpcr的内参基因的选择 5 (1/4667) _Unicorn 2018-11-07 2019-03-04 15:48:47 by 土豆君 [EMSA/Ch ] RNA 高温降解 60 (评阅+1) (1/3312) gwh212 2016-10-22 2019-01-18 14:51:40 by KI2018 [EMSA/Ch ] ChIP实验讲堂精彩内容分享! (2/1766) 华联科生物 2018-07...
我是做的植物材料果荚,做了很多次,跑胶在几百bp那里根本没有条带。前几天就想的干脆做下q试试,发现是有起峰的,关键是内参引物也被富集了,后面又换了2条内参引物,发现还是被富集到了,有uu们遇到过这种情况吗赞 回复 转发 赞 收藏 查看所有回复
主要通过ChIP-seq筛选到SARD1 and CBP60g的靶基因,通过ChIP-qPCR以及定量进行验证,发现其可以调控与SAR(systemic acquired resistance),ETI 及PTI正向调控相关基因;还发现SARD1 and CBP60g可结合一些免疫负调控基因,推测是与SA反馈抑制相关,避免自身免疫。另外还通过分析发现二者的结合元件GAAATTT,利用luciferase reporter...
㈣qPCR分析:选择合适的内参和特异性引物,确保qPCR分析的准确性和可靠性。同时,需考虑实验的技术变异,包括PCR扩增效率的变异和样本处理过程中的损失。 结论 染色质免疫共沉淀(ChIP)实验是研究蛋白质与DNA相互作用的重要技术。通过精确的实验设计、严格的样品处理和详细的数据分析,ChIP实验不仅可以揭示转录因子的DNA结合位...
ChIP Spike-in指的是在一个ChIP实验中,在纯化富集得到的目的DNA片段混合液中掺入一定量的已知序列外源DNA片段(最常用的就是lambda噬菌体的DNA)用于整个实验的质控及标准化,后续的荧光定量PCR可以检测Spike-in,得到的Ct值可以作为内参对目的Ct值进行标准化处理。也可以用在下游的二代测序中。
ChIP Spike-in指的是在一个ChIP实验中,在纯化富集得到的目的DNA片段混合液中掺入一定量的已知序列外源DNA片段(最常用的就是lambda噬菌体的DNA)用于整个实验的质控及标准化,后续的荧光定量PCR可以检测Spike-in,得到的Ct值可以作为内参对目的Ct值进行标准化处理。也可以用在下游的二代测序中。