1） ChIP级别的抗体能够识别目的蛋白的立体表位。这跟做Western Blot的抗体是有区别的，因为WB的抗体识别...
ChIP-qPCR是一种检测细胞内蛋白/DNA互作的靶向验证技术。该技术通过联合免疫共沉淀技术和qPCR检测技术,对目的蛋白在特定细胞/组织内的蛋白/DNA互作关系进行探究,验证蛋白/DNA的相互作用关系。该技术适用于目的蛋白在特定细胞/组织中的蛋白/DNA互作验证,或用于不同遗传背景/实验条件下的互作差异研究。因此,该技术是研究...
ChIP-qPCR是一种研究细胞内蛋白与DNA相互作用的检测技术。它结合了免疫共沉淀和qPCR方法，旨在揭示目的蛋白在特定细胞或组织中与DNA的结合情况。通过此技术，科学家可以验证蛋白与DNA的相互作用，并应用于研究特定细胞或组织中蛋白-DNA互作的验证，以及不同遗传背景或实验条件下互作的差异。ChIP-qPCR在研究细...
通过ChIP-qPCR判断ChIP成功与否是通过比较目的蛋白在阳性区域和阴性区域的富集度差异来判断的。 阳性区域比阴性区域富集度高4-8倍以下(也就是2-3个cycles),我们可以认为ChIP没有成功;如果在4-8倍以上,说明目的蛋白在阳性区域有富集,可以初步认为ChIP成功了,但具体还要依蛋白而定。比如H3K4me3 的ChIP,通常阳性区域比...
2、荧光定量PCR (ChIP-qPCR) 用于定量检测、验证特定位点的组蛋白修饰水平或转录因子结合水平。 示例结果图片如下(Input百分比分析法): ChIP下游荧光定量PCR的结果图 3、DNA微阵列芯片(ChIP-on-chip) 此方法已经基本被功能强大的二代测序所淘汰了。 4、二代测序(ChIP-Sequence) ...
ChIP-qPCR的实验目的不仅包含检测 ChIP 实验是否成功,为后续的建库和测序做准备,还包括检测蛋白与目标区域 DNA 的结合。一般情况下,可以根据已发表文献的ChIP-seq数据,来获取目标区域的引物信息,但当文献中查不到所需要的引物时,我们可以根据目标蛋白结合的靶基因的区域进行设计,比如转录因子通常在启动子区域结合,我们...
基因表达调控解析之利器—ChIP-qPCR 服务领域:特定转录因子与已知启动子区域的结合(Direct ChIP);在已知启动子的大片段范围内寻找特定转录因子的结合位点(ChIP-Scaning);在基因组范围内搜寻特定转录因子;结合的所有启动子片断(ChIP-on-Chip);组蛋白乙酰化、甲基化、***酸化水平检测。 质量保证:正确的5’端转录起始...
Chip-qPCR原理是利用抗体专一性的特征,首先利用靶向目标蛋白的抗体,下拉目标蛋白结合的DNA片段,然后对蛋白和与之结合的DNA片段进一步进行分离,从而得到与蛋白相互作用的DNA片段。进而对这些下拉片段进行DNA高通量测序或进行实时定量荧光PCR,从而确定目的蛋白在基因组中的结合位点。
裂解细胞，在细胞裂解液中加入孵育结合了抗体的Beads，目的蛋白通过其抗体便结合到Beads上，同时和诱饵蛋白互作的DNA，也一起沉淀到Beads上。洗涤掉未结合的DNA后，再用洗脱液将DNA-蛋白复合物从Beads洗脱下来，得到染色质免疫共沉淀产物。DNA-蛋白复合物去交联后，既可进行qPCR检测已知的DNA片段，也可通过二代测序的...
ChIP实验，全称为染色质免疫沉淀（Chromatin immunoprecipitation），是一种在体内研究特定蛋白与特异性DNA序列结合的生物学技术。这一技术的三个关键步骤包括“染色质”、“免疫”和“共沉淀”。染色质是由组蛋白和DNA组成，免疫部分涉及使用抗体特异性识别并结合染色质中的组蛋白，形成复合物，而共沉淀则是...