Chip-qPCR原理是利用抗体专一性的特征,首先利用靶向目标蛋白的抗体,下拉目标蛋白结合的DNA片段,然后对蛋白和与之结合的DNA片段进一步进行分离,从而得到与蛋白相互作用的DNA片段。进而对这些下拉片段进行DNA高通量测序或进行实时定量荧光PCR,从而确定目的蛋白在基因组中的结合位点。
洗脱:抗体洗脱液的原理是利用强酸(pH值2.8)或高盐(近中性)环境下,破坏结合力等因素,使得抗原抗体复合物变成抗原抗体单体。 5、DNA纯化 去除染色质交联之后,使用典型的酚-氯仿及随后的乙醇沉淀方法或使用 DNA纯化柱试剂盒来进行DNA纯化。一旦完成了 DNA 纯化,便可进行多种下游分析,包括ChIP-qPCR、ChIP-芯片和ChIP-...
ChIP-qPCR实验一般瞄准的是基因的启动子区域,这一部分相对于基因翻译区,信息要模糊的多,可以通过NCBI上的gene browser来辅助分析,一般可以在转录起始位点(TSS)上游100~1000bp选择,同时需要至少设计两对引物,从中选择效果较好的。以上即是本期的主要内容,从实验原理、一般实验流程和注意事项几个方面来详细介绍ChI...
该技术的核心原理是通过特异性抗体识别并结合目标蛋白(如转录因子),从而共沉淀出与其互作的DNA片段,进而分析这些DNA片段的序列及其与蛋白质的结合情况。ChIP实验为研究基因表达调控、转录因子功能及表观遗传机制提供了重要的实验依据。染色质免疫共沉淀(CHIP)实验介绍由普拉特泽生物分子检测平台总结分享,分子检测平台为广大...
ChIP实验的基本原理是在活细胞状态下,通过交联剂(如甲醛)固定细胞内蛋白质与DNA之间的相互作用,然后将染色质随机打断成一定长度范围内的片段。接着,利用特异性抗体与目标蛋白-DNA复合物的结合,通过免疫沉淀法富集目标蛋白结合的DNA片段。最后,通过DNA纯化及定量聚合酶链反应(qPCR)等方法,分析目标DNA序列的富集情况,从而...
ChIP-qPCR和普通逆转录-qPCR的引物设计有很大不同。 普通逆转录 qPCR引物设计里一个很重要的原则是引物序列要跨内含子,目的就是把cDNA模板和genomic DNA模板区分开来,避免引物结合到残留的genomic DNA模板上,导致假阳性非特异性扩增信号。 而在ChIP-qPCR的引物设计中,则不需要这样,如果这样做,对有些组蛋白修饰的位...
实验原理: 甲醛使DNA与其结合蛋白交联,通过超声波或酶处理,使染色质断裂为小片段,加入特定抗体,对目的基因进行标记,免疫沉淀得到靶片段,解交联得到基因片段,获得的基因片段可用于后续PCR分析。 检测流程 染色质准备→染色质剪切→染色质免疫沉淀→DNA纯化→qPCR ...
实验流程 一般ChIP的流程是:甲醛处理细胞——收集细胞,超声破碎——加入目的蛋白的抗体,与靶蛋白-DNA...
染色质免疫沉淀(ChIP)实验旨在通过特异性抗体识别和结合目标蛋白(如转录因子HIF1A),从而共沉淀出与其互作的DNA。通过后续的DNA提纯和qPCR分析,验证目标转录因子是否与特定DNA序列 (如启动子区域)结合,及其结合位置,为研究蛋白-DNA相互作用提供实验依据。实验原理 ChIP实验基于特异性抗体识别目标蛋白与DNA形成的...