小鼠脾脏淋巴细胞分离与 CFSE 染色步骤 实验材料: 小鼠 1 只、 组织剪 1 把、 镊子 2 把、 75%酒精、 小鼠固定板、 1640 培养液 (10%FBS, 1%双抗) 、含 0.1%FBS 的 PBS 溶液(无菌) 、PBS 溶液(无菌) 、ACK 溶液(无菌) 、移液 管、枪头、组织研磨棒(无菌) 、12 孔细胞培养板、15mL 离心管、300...
CFSE染色 荧光波长:λex=496 nm,λem=516 nm 所需设备: 培养箱(37℃CO2)移液器(20μl, 1000μl) 荧光显微镜(蓝色激发滤光片,绿色发射滤光片) 流式细胞仪(488 nm光源,绿色发射滤光片) 1、准备细胞悬液,用PBS(-)等合适的培养基a)调整细胞浓度至约107个/ml。 2、取1 ml细胞悬液至试管中,加入适量...
⑤CFSE染色时间: CFSE的初始浓度在合适范围内时,染色时间对细胞活性和增殖都基本没有影响,但若CFSE浓度高了,细胞的增殖水平则会随着染色的时间增加而降低,一般建议3~5 min相对较佳。 四、细胞体外培养时间: 建议原代细胞培养时间一般在48~96 h,48 h后增殖峰开始相对明显,易于组间比较分析,另CFSE会随细胞增殖分裂...
1.准备CFSE染料溶液。通常使用的浓度为5-10μM的CFSE染料溶液。可以将CFSE染料溶于合适的溶剂中,如无菌PBS(磷酸盐缓冲盐水)或DMSO(二甲基亚砜)等。 2.处理待染细胞。将需要染色的细胞分离出来,通常采用离心法获取细胞沉淀物。接下来,将细胞悬浮液转移到培养基中。 3.CFSE染料标记。将CFSE染料溶液与待染细胞混合...
CFSE染色方法弃上清加入1fbspbs液体重悬洗涤一次再用合适体积数目的1fbspbs重悬取出2106l的细胞悬液离心弃上清 细胞悬液置于离心管底部。离心管横放,将PBS滴加在靠近管口的管壁上。再将CFSE加在PBS滴上。维持离心管横向水平,拧上管盖,迅速垂直倒置离心管于涡旋器上涡旋。(可参考JOVE网上的CFSE标记视频) 步骤: 1...
方法/步骤 1 1. 用DMSO制备1mM 的CFSE溶液。用PBS或适当的缓冲液将其稀释成10-50 μM的CFSE溶液。2 2. 将1/10细胞培养基体积的CFSE溶液加入到细胞培养基中。3 3. 在37℃培养细胞15-30分钟。4 4. 用PBS或适当的缓冲液洗涤细胞两次。5 5. 用490 nm激发波长，530 nm发射波长的滤光片的荧光显微镜观察...
CFSE染色流式实验 Carboxy fluorescein Diacetate Succinimidyl Ester(CFSE羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯)染色法,是一种检测细胞分裂的方法。CFSE能够轻易穿透细胞膜,被细胞内的酯酶除去醋酸酯组分后产生荧光,而未进入细胞的CFSE无荧光(Quah等,2007)。 荧光态的CFSE与细胞内的氨基共价结合,偶联到蛋白上,伴随细胞分裂...
CFSE 是一种可标记活细胞的荧光染料，具有较 强的细胞膜通透性。CFSE 进入细胞后，其乙酸基团 可被细胞内酯酶水解去除，丧失膜通透性，而具有很 高的荧光活性，被激发将发生绿色荧光。此时的 CFSE 能与细胞骨架蛋白形成可激发荧光的蛋白复 合物，该复合物不能脱离细胞，且不会污染邻近细 胞，使非标记细胞免受染料...
荧光显微镜下观察可见,标记 CFSE 的 BMSCs 细胞膜、细胞质和细胞核都发出绿色荧光,整个细胞 呈绿色,细胞核的荧光强度最高。CFSE 标记的 BMSCs 仍保持良好的细胞形态,呈梭形或多角形。BMSCs 标记 CFSE 后进行 Hochest 33342 染色,以计算 CFSE 标记率,结果显示:CFSE 浓度为 2. 5 μmol /L、标记时间为 20 mi...