CETSA技术基本原理 2013年瑞典卡罗琳斯卡(Karolinska)研究所开发了一种可以在体内检测药物与靶标蛋白结合强度的方法,即细胞热迁移技术(cell thermal shift assay, CETSA)技术。CETSA 技术,由体外热迁移技术(thermal shift assays, TSA)发展而来。 TSA 是基于蛋白质随着温度增加而逐渐变性的原理来表征蛋白质热稳定性的技术。
CETSA技术基本原理 2013年瑞典的卡罗琳斯卡 (Karolinska) 研究所开发了一种可以在体内检测药物与靶标蛋白结合强度的方法,即细胞热迁移技术 (cell thermal shift assay, CETSA)。CETSA 技术由体外热迁移技术 (thermal shift assays, TSA) 发展而来。 TSA 是基于蛋白质随着温度增加而逐渐变性的原理来表征蛋白质热稳定性...
因此,TMED9参与了MUC1突变体在早期分泌途径的滞留和积累,并可能是BRD4780的直接作用靶点。针对此,研究采取细胞热移位测定法(Cellular thermal shift assay,CETSA)证实细胞内BRD4708和TMED9存在直接相互作用。凭借其能在生理条件下进行细胞水平分析的优势,CETSA成为了内源蛋白-药物相互作用分析技术的生力军,是表性筛选下游...
研究人员首先借助计算机对AlphaFold预测的SPY蛋白结构开展了13,000余个小分子化合物的虚拟分子对接。基于预测的结合常数和结合模式选取了130个化合物进行了候选化合物与SPY蛋白互作和结合常数的湿实验评价(Thermal Shift Assay, TSA和Bio-layer interferometry, BLI),最终选定SOFTI作为先导化合物进行后续研究(图1)。 图1...
Nordlund和他的同事们分析了在细胞周期的4个阶段过渡期间在人血细胞中发现的所有蛋白之间的相互作用状态的动态变化。他们使用了Nordlund团队之前开发出的一种技术,即细胞热转移测定(Cellular Thermal Shift Assay, CETSA),它能够让科学家们区分哪些蛋白独立地存在着,哪些蛋白位于蛋白复合物中。
研究人员首先借助计算机对AlphaFold预测的SPY蛋白结构开展了13,000余个小分子化合物的虚拟分子对接。基于预测的结合常数和结合模式选取了130个化合物进行了候选化合物与SPY蛋白互作和结合常数的湿实验评价(Thermal Shift Assay, TSA和Bio-layer interferometry, BLI),最终选定SOFTI作为先导化合物进行后续研究(图1)。
Nordlund和他的同事们分析了在细胞周期的4个阶段过渡期间在人血细胞中发现的所有蛋白之间的相互作用状态的动态变化。他们使用了Nordlund团队之前开发出的一种技术,即细胞热转移测定(Cellular Thermal Shift Assay, CETSA),它能够让科学家们区分哪些蛋白独立地存在着,哪些蛋白位于蛋白复合物中。
Cellular thermal shift assay (CETSA) The intact cell CETSA was performed according to the previous study29. Briefly, LUSC cells were treated with DMSO or 10 μM ZK53 for 2 h. Then the cells were harvested and aliquoted into 0.2 mL PCR tubes. After denaturing at different temperature...
Cellular thermal shift assay MDS-L cells were treated by DMSO or RSL3 (Selleck, USA) for 1 h. The cells were washed for three times with precooled PBS and resuspended with 50 μL PBS. The cells were divided into three groups and separately put into water bath at 37 °C, 42...
细胞敲除实验发现只有敲除PPT1能促进NLRP3表达(图2D),并通过TSA(thermal shift assay)进行了验证(图2E)。接着通过分子对接预测了结合位点(图2F),并通过蛋白点突变实验验证了结合位点,即结合位点突变以后MST(microscale thermophoresis)检测发现PPT1蛋白不能与苯丙酮酸结合,并且不能促进NLRP3表达(图2G、H)。最后深入...