Day 1: 激活CD8+T细胞 首先,我们继续上一篇关于CD8+T细胞激活的内容。在1:1的比例下,用CD3/CD28激活剂(能提供第一和第二信号)来刺激CD8+T细胞。然后,将这些细胞放入含有10% FBS、1%青链霉素双抗生素以及10ng/ml IL-2(只有激活后的T细胞才会表达IL-2受体)的DMEM/1640完全培养基中进行培养。细胞密度调整到1×...
细胞毒性T细胞(CD8+T细胞)概述 CTL是什么细胞? 细胞毒性T淋巴细胞(CTL细胞)通常称为CD8+T细胞,是适应性免疫系统的关键组成部分,在免疫系统抵御病原体(如病毒、细菌和肿瘤)中发挥重要作用[1]。 辅助性CD4+T细胞(如Th1、Th2、Th9、Th17、Th22、Tfh和Treg)是在胸腺中生成并表...
我们内部的一项初步实验表明,在初次刺激后用ImmunoCult™ T细胞激活剂反复刺激人T细胞会导致出现衰竭表型。为此,每2 - 3天以25 μL/mL浓度的激活剂刺激一次T细胞,并在ImmunoCult™-XF培养基中总共培养14天。通过评估表面标志物PD-1、TIM-3、LAG3以及转录因子TOX的表达来评估衰竭程度。此外,可以通过检测细胞在再...
Day14:肿瘤细胞消化后终止洗涤,以5×105 cells/ml的浓度重悬于培养基中,并以1ml/孔接种于24孔培养板中,培养箱孵育过夜。 Day15:收集CD8+T细胞,计数细胞。对于所有共培养孔,上层放入小室(贴壁细胞可不加),将CD8+T细胞按1 : 1、2 : 1、5 : 1的比例分别添加到小室上层,终体积300ul,孵育18小时。孵育结束后...
从患者9、10、11分离的表达neoTCR的T细胞与匹配的黑色素瘤细胞系共培养后,表达neoTCR的CD8+T细胞中4-1BB活化标志物上调,对相应的自体黑色素瘤细胞系也表现出特异性细胞毒性,而不识别错配的对照细胞系。 因此,从抗PD-1治疗无效的患者中分...
图5. 2不同肽刺激后CD8+ T细胞增殖流式检测结果 CD8+ T cell proliferation after stimulation with different peptides A:NormalCD8+ T cell; B: CD8+ T cell stimulated with NP89-97; C: CD8+ T cell stimulated with NP198-206; D: CD8+ T cellstimulated with NP64-71; E: CD8+ T cell stimu...
接下来，采用磁珠法提取并刺激CD8+T细胞。首先准备好提取buffer，按照比例计数PBMC，加入10e7个细胞进行buffer重悬。充分混匀CD8磁珠，加入细胞悬液中，冰上孵育15min。离心并弃去上清，重复步骤直至含激活磁珠的培养基制备完成。在第二阶段，充分混匀CD3/CD28磁珠，吸取磁珠加入EP管，并加入等体积的完全培养...
小鼠脾脏CD8+T细胞的磁珠分选 一、制备脾脏单细胞悬液 8周龄C57BL/6小鼠摘眼球放血,无菌分离脾脏,于70um滤网上研磨收集脾细胞,过滤、离心,再以RPMI-1640wan全培养液重悬。 二、磁珠标记 1. 细胞计数为8×107/mL。 2. 400×g离心4分钟,去除上清。
磁珠分选CD8+T细胞10ulcd8fitc130080601并在4暗箱中培养5加入2mlbuffer洗涤细胞以300g离心10min完全弃去上清 磁珠分选CD8+T细胞 1.显微镜下观察PBMC,生长良好。计数细胞为1.0×107个。以300g离心10min,完全弃去上清。 2.加入2ml buffer重悬,再次洗涤,以300g离心10min,完全弃去上清。 3.加入40ul buffer重悬PBMC。 4...
5.如权利要求1-4之一所述的CD8T细胞的扩增培养方法,其特征在于,在扩增培养抗原特异性CD8T细胞时,补充细胞因子作为CD8T细胞增殖的第3信号。 6.如权利要求5CD8T细胞的扩增培养方法,其特征在于,所述细胞因子为IL15及IL2或IL15及IL7。 7.如权利要求1-4之一所述的CD8T细胞的扩增培养方法,其特征在于,还包括以下步骤...