步骤:首先制作标准曲线(测定细胞具体数量);其次进行细胞活性检测;最后进行细胞增殖-毒性检测。注意事项:先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK试剂后的培养时间。 一. 制作标准曲线(测定细胞具体数量) 1、首先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞到培养板内。 2、按照比例(例如:1/2比例)依...
8. 如果实验中待测物质有氧化还原剂，在不含细胞的培养基中加入药物，然后加入CCK-8 试剂在一定时间内检测，和不加药物的培养基进行比较 （只加 CCK-8 试剂），如果 OD 值明显偏高，则说明有反应，正式检测时则需要除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基和10ul CCK-8进行检测。9. 加 CCK...
方法/步骤 1 1) 在96孔板中配制100μl 的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养 24 小时 (在 37℃，5% CO2 的条件下)。2 2)向培养板加入 10μl 不同浓度的待测物质。3 3)将培养板在培养箱孵育一段适当的时间 (例如: 6,12, 24 或 48 小时)。4 4)向每孔加入 10μl CCK8 溶液（Engreen） (注意...
CCk8法主要包括三个步骤:准备梯度离心液、加载样品、离心和收集分离蛋白。 首先,准备梯度离心液。CCk8法的关键是通过离心速度渐变离心来实现纯化蛋白质。为了实现这一点,需要准备一种含有不同浓度的梯度离心液。一般情况下,使用一种浓度较高的离心液,在其中混入比浓度较低离心液的比例,以形成一个梯度。通常情况下,...
(4)加入CCK-8:两种方法,每孔直接加入10ul的CCK-8溶液,或者配置成含10% CCK-8溶液的培养基以换液的形式加入,注意加入过程中避免产生气泡,气泡会影响吸光度的检测,可以将枪头浸入培养液中缓慢加入。 (5)加入CCK-8后孵育时间:将加完CCK-8的培养板放入37°C、 5%CO2 培养箱中孵育1-4h,CCK-8试剂加入后孵育...
悬浮细胞CCK-8培养方法步骤 悬浮细胞使用CCK-8进行细胞增殖或毒性检测的步骤如下：准备细胞悬液：首先收集对数生长期的悬浮细胞，并调整细胞悬液的浓度。接种细胞：将细胞悬液加入96孔板中，每孔约100μl，以达到适当的细胞密度（通常为1000-10000个细胞/孔）。预培养：将含有细胞的96孔板放入37℃、5% CO2的培养箱...
4. 向每孔加入 10 ul CCK-8 溶液 (注意不要在孔中生成气泡,它们会影响 O. D 值 的读数,斜着培养板壁加, 不要插到培养基液面下加) 。加入后轻轻振摇培养板。 5. 将培养板在培养箱内孵育 1-4 小时。 6. 用酶标仪测定在 450 nm 处的吸光度。
三、CCK-8法的操作步骤 1. 细胞预处理 将生长的细胞悬浮液均匀分配至不同的孔板中,使每个孔内细胞数大致相等,保证实验结果的准确性。 2. 添加CCK-8试剂 向各孔内加入CCK-8试剂,使其充分接触到细胞。待反应一定时间后,测定吸光度。 3. 数据处理和分析 根据吸光度值计算细胞活力指数,进一步分析实验结果,获取所...
实验步骤: 制作标准曲线(此步骤必须要好好做) 从上周的帖子中,我们知道细胞数目、细胞状态对CCK8的值影响很大。另外,虽然说10%的CCK8溶液对细胞培养影响不大,但是一个异物在培养基中待太久,也会影响细胞状态。 做过显色实验,比如测定蛋白浓度或者ELISA的人,细心一点都会发现,这个显色反应有一定的饱和度(不是指...
实验步骤: 制作标准曲线(此步骤必须要好好做) 从上周的帖子中,我们知道细胞数目、细胞状态对CCK8的值影响很大。另外,虽然说10%的CCK8溶液对细胞培养影响不大,但是一个异物在培养基中待太久,也会影响细胞状态。 做过显色实验,比如测定蛋白浓度或者ELISA的人,细心一点都会发现,这个显色反应有一定的饱和度(不是指...