Gateway™ 载体转换系统旨在使用限制性内切酶和连接酶将任何载体转换为 Gateway™ 目的载体。Gateway™ 试剂盒包含带ccdB 基因 (1) 和氯霉素抗性基因侧区的attR 重组位点,经平末端克隆至任何载体的多个克隆位点中。ccdB存活2感受态细胞可用于扩增含有ccdB 基因的 Gateway™ 载体。Gateway™ 载体转换系统具有以下...
因此可以显著降低不含重组质粒的菌落数量,使筛选过程更简单、克隆过程更高效。 Gateway技术(由Invitrogen开发)是旧系统的更现代化更有潜力的版本。Gateway利用了ccdB基因,其质粒中含有ccdB基因,当表达该基因时,细胞不能繁殖。成功克隆后,插入片段完全取代了ccdB基因,不含插入片段的菌落不能生长繁殖,因此可以高效的鉴定...
Bernard,P.等的图片展示了pKIL18 / 19载体,并展示了限制性内切酶介导的ccdB破坏的概念,从而鉴定出目标阳性克隆。 Gateway®技术(由InvitrogenTM公司开发)本质上是这个旧系统的一个更现代化的版本,其附加优势将在后续的Gateway克隆一节中讨论。在ccdB方面,Gateway利用了相同的原理,即细胞在表达该基因的同时不会繁殖。
Gateway的核心之一就是利用ccdB的毒性,从而达到negative selection. ccdB是一种DNA gyrase, 其工作原理如下图: 它能让DNA的超螺旋结构变成逆向螺旋,因此对E.coli具有毒性。 Gateway如何利用它的毒性呢? 上图是一个LR反应,可以看见,如果clone成功的话,destination的ccdB将被一个基因替换掉,而最终产物将不携带ccdB...
关注ccdB方面,Gateway 利用了相同的原理,即细胞在表达基因时不会繁殖。简而言之,该系统中的向量“骨干”包含ccdB。成功的插入将完全取代ccdB与调查员感兴趣的插入。因此,正确克隆的识别效率要高得多,因为那些不包含所需插入片段的克隆不应生长 CcdB 抗性大肠杆菌菌株完善系统...
Gateway ® Vector Conversion System with One Shot ® ccdB For conversion of any vector of choiceSurvival, TCells, R Competent
ccdB 基因质粒的增殖,设计用于 Gateway™ 载体转化系统,可用于 Gateway™ 目的、供体和超螺旋入门载体增殖。转化效率为 >1 × 109 个转化体/µg 质粒 DNA。ccdB Survival™ 2 T1R大肠杆菌菌株来自 TOP10 菌株。ccdB Survival™ 2 T1R 大肠杆菌...
这个系列的gateway载体我用过，但没有用作亚细胞定位观察，因为103是35S启动子，其观察到的定位不一定...
转过含有ccdB基因的Gateway系列载体，转入农杆菌，一样能生长，并且还诱导出了含空载体的转基因毛状根。
ccdB进行了改进。Gateway 技术即利用了ccdB选择 方法,确保高效率的分离重组克隆,典型的效率高于 95%。Gateway Vector Conversion System with One Shot ccdb Survival Competent Cells,就是通过在中间 载体2 个重组位点间添加ccdB筛选标记来实现的。 Zero Background 技术采用ccdB基因,能够进行高效 ...