使用CST的Caspase-3 (8G10) Rabbit mAb(#9665S),它可以检测内源性水平的全长caspase-3(35 kDa)以及caspase-3裂解后产生的大片段(17 kDa),这两个条带的位置和稳定性都很好。🔍 电压建议: 建议先以80-90v的电压跑平,然后再转至120-150v继续跑,这样可以确保蛋白条带清晰分开。如果只使用80v,15kDa和10k...
2018「年度最高引用抗体品牌」CST 抗体公司建议您:通常情况下,做 WB 检测时,用既能识别全长 caspase-3(也就是非活性的 procaspase)又能识别剪切、活化 caspase-3 的抗体是更加明智的选择。因为这些抗体(如 CST 公司的 #9665 和 #14220)识别的抗原表...
在制备样品时,需要确保每个样品中加入的PBS和loading buffer的量一致,以便进行准确的定量。如果细胞数量差异较大,可以根据WB结果使用ImageJ软件进行调整。 在电泳过程中,如果发现曝光效果不佳,可以考虑将凝胶中间切开,因为下面可能含有Cleaved Caspase-3。使用分子量较小的抗体时,选择12.5%的凝胶较为合适。 通过这些步骤...
用于Caspase-3活性检测的传统技术包括酶联免疫吸附实验 (ELISA)、免疫印迹 (WB) 等,这些方法结果可靠,但是一般来说这些方法的灵敏度较低,特异性不强,检测中需要大量样品,所用的实验仪器设备和抗体试剂成本相对较高,测量步骤也复杂繁琐等。而...
二、WB实验中出现白斑的原因：- 转膜气泡：确保转膜过程中无气泡产生。- 抗体分布不均：使用摇床使抗体均匀分布。三、PVDF膜处理：- 甲醇处理：剪好的PVDF膜用甲醇处理1-2分钟。- 转膜液孵育：在零度转膜液中孵育3-5分钟。四、抗体专一性识别检测方法：- 蛋白质相互作用检测：采用免疫共沉淀、Pull...
研究采用了酶活测定,亚硝基化修饰组学分析,WB等检测手段,发现蛋白S-亚硝基化可以修饰caspase-3的半胱氨酸残基,这导致了caspase-3活性的降低,并进一步抑制了其对牛肉肌原纤维蛋白的蛋白水解能力。本研究为解释蛋白质亚硝基化对肉质的调控机制提供了一个新的视角。
由于 caspase-3 存在多种翻译后修饰,在 WB 检测的条带大小可能与预测值不同。 在进行相关实验时,除了需要注意常规问题外,还要特别关注以下关键控制点: 1. 样本制备:添加复合蛋白酶抑制剂以避免靶标蛋白降解。整个样本制备过程中,保持样本置于冰上。通过 Bradford 分析、Lowry 分析或 BCA 分析测定样本总蛋白浓度。
Western检测: 按照1:1000用百奥莱博提供的Western一抗稀释液稀释抗体。 把经过封闭的蛋白膜与稀释好的一抗4℃缓慢摇动过夜,确保稀释的抗体至少能在摇动的瞬间覆盖蛋白膜。 回收稀释的一抗,4℃保存以备下次继续使用。 按照Western的实验步骤进行后续的洗涤、二抗孵育、洗涤和检测等操作。具体操作可以参考如下网页:http...
western blot 检测caspase-3遇到问题,求解答 本人通过DNA-ladder,已做出梯度条带,所以现在欲检测caspas-3,买的是abcam的caspase-3的多抗,说明书上说的是可以检测到caspase-3和cleaved caspase-3,但是现在的检测结果如图,实验组和对照组全部是一个情况。
这种激活的Caspase-3会切割细胞内的其他蛋白,最终导致细胞凋亡。 如果你想检测一个细胞是否正在凋亡,一个常用的方法就是通过Western Blot(WB)来检测细胞中是否有活性的Caspase-3。这种方法可以帮助你了解细胞内Caspase-3的活性状态,从而判断细胞是否正在走向凋亡。 所以,下次你在研究细胞凋亡时,不妨关注一下Caspase-3...