caspase3比色蛋白酶试剂盒通过简单、方便的测定caspases活性的方法这种方法通过识别序列DEVD,这种方法基于用分光光度计测定从标记底物DEVD-pNA分开的发色团(pNA)此时游离的pNA的发射光谱可用分光光度计或酶标仪或微量滴定板在400或405nm检测,通过样本和背景的吸光度比较来测定caspase3活性的增加,进而推知Caspases的活性...
3.每一浓度标准管OD405值为x轴,对应的pNA浓度为y轴,用Excel制作pNA浓度对OD405值的标准曲线。 三、样品测定操作: 1.按下表设置96孔板反应体系。底物zuì后加入以使各管反应起始时间相同。设置不加样品的空白对照管。酶活力不足或过高,可增加或减少样品。
Caspase-3又称CPP32、Yama或apopain,属于CED-3亚家族,是细胞凋亡过程中的一 个关键酶。 利用Caspase-3分解底物Ac-DEVD-pNA产生黄色的对硝基苯胺(pNA),后者在405nm 有da吸收峰,通过测定吸光值升高速率即可得出Caspase-3酶活性大小。 二、试剂盒组分与配制: 试剂名称 规格 保存条件 备注 提取液 液体60mL×1瓶 ...
4. 测定Caspase 3活性:将样本(细胞裂解液100μl、阴性对照、阳性对照)加至抗caspase 3 包被MTP的微孔中,37℃孵育1小时, 弃去未结合标本, 以孵育缓冲液于室温洗板3 次,每次1min。 加入新鲜配制的Caspase底物溶液, 37℃ 反应1~3小时; 然后进行荧光光度检测, 激发波长400nm, 发射波长为505nm。 结果判断 Caspase...
这样就可以计算出样品中含有多少个酶活力单位的caspase 3/7。说明:在本试剂盒的检测体系中,底物的起始浓度为0.2mM,此时底物是饱和的,对于许多样品而言在37ºC孵育2个小时以内底物都是饱和的;对于样品中caspase 3/7酶活力特别高的情况,须用裂解液适当稀释样品后再进行测定。
Caspase-3是凋亡过程中最主要的终末剪切酶,因而也是研究最多的caspase,它激活pro-caspase-2,6,7,9等,特异水解多种凋亡关键蛋白如PARP,介导细胞核染色质固缩、凋亡小体生成、核DNA断裂。试剂盒测定原理基于Caspase-3特异水解多肽底物acetyl-Asp-Glu-Val-Asp p-nitroanilide (Ac-DEVD-pNA),释放硝基苯胺pNA。游离...
④用 Bradford 法检测待测样品中的蛋白浓度(由于裂解液中含有较高浓度的 DTT, 不 适合采用 BCA 法进行蛋白浓度测定),进而计算出一个样品单位重量蛋白中所含的 caspase 2 的酶活力单位即 Caspase 2 酶活力单位/mg protein。 北京雷根生物技术有限公司 www.leagene.com 计算结果: ① Caspase 2 酶活力单位的定义...
胱天蛋白酶3(caspase-3)活性测定试剂盒 产品规格 50管/24样 用途范围 科研检测 是否进口 否 加工定制 否 货号: qys-300722 储存条件 2-8℃ 提供服务: 可提供代测服务 保质期: 3个月 检测样本: 血清,组织,土壤,细胞,细菌等 试剂盒提示: 未用完试剂注意保存温度 自备仪器: 酶标仪,离心机等 需要说明书: ...
这样就可以计算出样品中含有多少个酶活力单位的caspase 3/7。说明:在本试剂盒的检测体系中,底物的起始浓度为0.2mM,此时底物是饱和的,对于许多样品而言在37℃孵育2个小时以内底物都是饱和的;对于样品中caspase3/7酶活力特别高的情况,须用裂解液适当稀释样品后再进行测定。
本Caspase3活性检测试剂盒是基于casepase3可以催化底物Ac-DEVD-pNA(acetyl-Asp-Glu-Val-Aspp-nitroanilide)产生黄色的pNA(p-nitroaniline),从而可以通过测定吸光度来检测caspase3的活性。pNA在405nm附近有强吸收。 试剂盒中提供了caspase3催化产生的黄色产物pNA,可以作为定量caspase3酶活性的标准品。 本试剂盒用酶标...