Caspase-3正常以酶原（32KDa）的形式存在于胞浆中，在凋亡的早期阶段，它被激活，活化的Caspase-3由两个大亚基（17KDa）和两个小亚基（12KDa）组成，裂解相应的胞浆胞核底物，最终导致细胞凋亡。但在细胞凋亡的晚期和死亡细胞，caspase-3的活性明显下降。Caspase-3经过细胞外途径和细胞内途径来介导细胞凋亡，细胞外...
多种炎症细胞,如巨噬细胞、中性粒细胞和淋巴细胞,被募集到损伤部位并产生分解代谢和促炎介质来启动组织修复。炎症部位募集的免疫细胞释放丝氨酸蛋白酶,如中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)、蛋白酶3(PR3)、胰蛋白酶和组织蛋白酶G(CG),促进关节...
Caspase 3具有特异性的底物多肽识别序列,即天冬氨酸-谷氨酸-缬氨酸-天冬氨酸(DEVD)。 本试剂盒用TF2-DEVD-FMK作为荧光指示剂,用于Caspase-3/7活性的检测。TF2-DEVD-FMK具有细胞渗透性、无细胞毒性,在凋亡细胞中能与活化的casepase-3/7进行不可逆的结合。一旦与Caspases结合,这种绿色荧光染料会被保留在细胞中。
一、Western blot 分析Procaspase-3的活化,以及活化的Caspase-3及对底物多聚(ADP-核糖)聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]等的裂解。1. 方法收集细胞→PBS洗涤→抽提细胞裂解液→蛋白定量→SDS-PAGE电泳→硝酸纤维素膜或PVDF膜转移→5%脱脂奶粉封闭,室温1.5~2 h或4°C过夜→Caspase-3多抗或单抗室温反应1...
在细胞凋亡启动时，116kD的PARP在Asp216-Gly217 之间被caspase-3剪切成31kD和85kD两个片段，使PARP中...
Caspase 3,即Cysteine-requiring Aspartate Protease 3,也称CPP32、Yama或apopain,属于Caspase家族的CED-3亚家族(CED-3 subfamily),系一种在细胞凋亡过程中起重要作用的蛋白酶,也是哺乳动物细胞中研究最多的一个Caspase。 Caspase 3可以剪切procaspase 3、6、7和9,且可以直接特异性剪切多种Caspase底物,包括PARP(poly...
细胞内的酶被激活，可降解细胞内的重要蛋白质，最终导致细胞不可逆地走向凋亡。它们的活性位点均包含半胱氨酸残基，能够特异性的切割靶蛋白天冬氨酸残基上的肽键，故名。Caspase负责选择性地切割某些蛋白质，从而造成细胞凋亡。最早发现人类中与线虫ced-3同源的基因是ICE（interleukin-1 p-converting enzyme，白介素1 ...
Caspase-3是凋亡过程中最主要的终末剪切酶,因而也是研究最多的caspase,它激活pro-caspase-2,6,7,9等,特异水解多种凋亡关键蛋白如PARP,介导细胞核染色质固缩、凋亡小体生成、核DNA断裂。试剂盒测定原理基于Caspase-3特异水解多肽底物acetyl-Asp-Glu-Val-Asp p-nitroanilide (Ac-DEVD-pNA),释放硝基苯胺pNA。游离...
一旦caspase-3和caspase-7(caspase-3/7)被激活,即当细胞处于凋亡状态时,caspase-3和caspase-7便会切割DEVD肽,然后DNA结合试剂便会开始呈现荧光(见视频1)。 视频1:Capase-3/7活性检测法原理:用核标记物DRAQ5(品红)和CellEvent™Capase-3/7绿色荧光检测试剂(Invitrogen™)(黄色)处理COS7细胞。CellEvent™...