Caspase-3活性检测实验Release Time:2020-07-11 一、Caspase-3简介:※ Caspase家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用,其中caspase-3为关键的执行分子,它在凋亡信号传导的许多途径中发挥功能。※ Caspase-3正常以酶原(32KD)的形式存在于胞浆中,在凋亡的早期阶段,它被激活,活化的Caspase-3由两个大亚基(17...
与细胞凋亡密切相关的Caspase家族是一组高效蛋白水解酶，通过激活Caspases可以实现细胞的凋亡，其中Caspase-3是最为关键的效应蛋白酶，在生物实验中，Caspase-3可以作为细胞凋亡的指示剂，通过检测其活性强弱可以判断细胞的凋亡情况。背景说明 背景说明 Caspase-3正常以酶原（32KDa）的形式存在于胞浆中，在凋亡的早期阶段...
3比色蛋白酶试剂盒通过简单、方便的测定caspases活性的方法这种方法通过识别序列DEVD,这种方法基于用分光光度计测定从标记底物DEVD-pNA分开的发色团(pNA)此时游离的pNA的发射光谱可用分光光度计或酶标仪或微量滴定板在400或405nm检测,通过样本和背景的吸光度比较来测定caspase3活性的增加,进而推知Caspases的活性。
3.离心12000rpm/10分钟,收集上清,即为细胞总蛋白; 4.取少量上清(1-2μl),用Bradford或BCA法进行蛋白质定量,检测前将蛋白用细胞裂解液(含Cocktail)稀释为2g/l。 (二)体外Caspase-3的活性检测: 1.实验设空白对照孔和待测样品孔,均加入含荧光底物Ac-DEVD-AMC的Caspase-3反应缓冲液(反应缓冲液使用前加入Reagen...
产品名称 caspase-3活性检测试剂盒分光光度法 规格 20T 货号 YS-S963551 测定步骤:1.加样1. 除包被外都需45度加样2.加样体积要准确3.管底加样,不能加在管壁上4.加样时不能产生气泡2.温浴1.加标本后和加结合物后,应立即放入按规定的反应温 度的水浴箱。2.各ELISA板不应叠在一起。3.为避免蒸发,...
下转步骤3d。 对于组织样品:按照每3～10mg组织加入100微升裂解液的比例加入裂解液,在冰浴上用玻璃匀浆器匀浆。然后把匀浆液转移到1.5mL离心管中,冰浴再裂解5分钟。 4℃ 16000～20000g离心10～15分钟。 把上清转移到冰浴预冷的离心管中。 立即测定caspase 3/7的酶活性或-80℃保存样品。同时可以取少量样品用Bra...
目前有专用的试剂: 荧光染料和caspase-3的底物结合,加入细胞培养液,细胞可以自由摄入。进入细胞后,底物被活化的caspase3或者7降解后,释放的荧光染料进入细胞核,染色DNA。 流式细胞仪检测,只要是和阴性对照相比荧光信号增高的,就是有caspase激活的。荧光强度越高,酶的活性越强。 这个试剂 life technology出的 CellEven...
实验:蛋白质免疫印迹检测Caspase-3 的活化 预习报告 (北医综合实验) 一、Western Blot 实验原理 Western Blot (蛋白质免疫印迹法)是将经过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的蛋白 质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维索薄膜——NC 膜)上,固相载体以非共 价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肤类型及其生物学活性不变。
Cayman的Caspase-3/7细胞活性检测试剂盒提供了一种方便的方法来检测细胞裂解物中caspase-3和caspase-7的活性。使用caspase-3/7特异性底物N-Ac-DEVD-AFC监测活性。活性酶的裂解作用会产生一种高荧光产物,可以使用400纳米的激发波长和505纳米的发射波长进行测量。试剂盒中包含活性caspase-3作为阳性对照,还含有诱导细胞...
3.快速将上清吸入另一预冷的干净离心管,置于冰上或-80℃冰箱保存备用。三、对上述处理过的上清用Bradford 法进行蛋白定量。【注】:● 必须进行蛋白定量,以保证后续步骤的蛋白上样量足够,否则容易出现检测不到结果的情况。四、Caspase 3活性检测1.取50μl裂解上清,加入50μl检测缓冲液。2.再加入10μl caspase-...