2020年3月26日,哈佛医学院Benjamin P. Kleinstiver团队在Science在线发表题为“Unconstrained genome targeting with near-PAMless engineered CRISPR-Cas9 variants”的研究论文,该研究设计了化脓链球菌Cas9(SpCas9)的变体,以消除NGG PAM的要求。 该研究开发了一种名为SpG的变体,能够针对一组扩展的NGN PAM,并进一步优化...
但如果一个感兴趣的基因组区域碰巧没有合适的PAM,工程师就得求助另一种Cas酶。 现在,哈佛医学院的生化学家Benjamin P. Kleinstiver博士领导的研究小组设计了不需要特定PAM就能结合和切割DNA的Cas9蛋白变体,命名为SpG和SpRY,能够对绝大多数人类基因组进行不受限打靶,并具有单碱基对精度,从而纠正心脏病、II型糖尿病...
为了进一步评估SpRYgests的无PAM性质,研究人员使用64种gRNAs对WT SpCas9、SpG (一种SpCas9变体,之前设计为NGN PAMs靶向位点) 和SpRY进行了大规模比较,这些gRNAs靶向一系列NNNN PAM,其中第2 /3 /4位位包含所有碱基组合。Cas9和SpG的PAM...
这些结果证明SpRY在体外可以作为一种有效的无PAM内切酶。 图2. WT SpCas9和SpRY对线性化质粒底物的DNA切割效率(图源自Nature Biotechnology)为了进一步评估SpRYgests的无PAM性质,研究人员使用64种gRNAs对WT SpCas9、SpG (一种SpCas9变体,之前设计为NGN PAMs靶向位点) 和SpRY进行了大规模比较,这些gRNAs靶向一系列NNNN P...
之后,研究者还证实,高保真版本的SpCas9-HF1突变体可以和SpG及SpRY兼容,从而获得不受PAM限制且安全性高的SpG-HF1和SpRY-HF1突变体。有了如此强大的SpG和SpRY工具及衍生的SpG/SpRY-CBE及SpG/SpRY-ABE,研究者能更加自如精准的诱导各种点突变。 总体而言,本研究开发的SpCas9突变体SpRY是当前对PAM序列兼容性最高的...
现在,哈佛医学院的生化学家Benjamin P. Kleinstiver博士领导的研究小组设计了不需要特定PAM就能结合和切割DNA的Cas9蛋白变体,命名为SpG和SpRY,能够对绝大多数人类基因组进行不受限打靶,并具有单碱基对精度,从而纠正心脏病、II型糖尿病、骨质疏松症和慢性疼痛等疾病的相关突变。
现在,哈佛医学院的生化学家Benjamin P. Kleinstiver博士领导的研究小组设计了不需要特定PAM就能结合和切割DNA的Cas9蛋白变体,命名为SpG和SpRY,能够对绝大多数人类基因组进行不受限打靶,并具有单碱基对精度,从而纠正心脏病、II型糖尿病、骨质疏松症和慢性疼痛等疾病的相关突变。
Walton(作者之一)等在此报告了两个重要的变体:SpG(它可以对一组扩展的NGN PAMs设靶)和一个被称作SpRY的近乎无PAM的变体。总之,SpG和SpRY能一同用CRISPR-Cas9核酸酶对几乎整个基因组进行不受限设靶,并具有单碱基对的精度。应用SpRY,作者能够...
本研究首先对大白菜和甘蓝基因组的PAM数量进行分析,发现Cas9-NG/SpG变体在大白菜和甘蓝基因组中潜在靶位点数是SpCas9的两倍多,SpRY几乎可靶向基因组所有位点。随后,构建了植物CRISPR/Cas9-NG、CRISPR/SpG和CRISPR/SpRY基因编辑系统,进而通过大白菜/甘蓝原生质体的瞬时转化体系比较了Cas9-NG、SpG和SpRY变体在不同PAM位...
为了克服这一障碍,在麻省总医院基因医学中心生物化学家Benjamin P. Kleinstiver的领导下,这些研究人员通过基因改造设计出两种不需要特定PAM就可结合和切割DNA的Cas9蛋白变体,并将它们命名为SpG和SpRY。这两种蛋白变体可允许以常规CRISPR-Cas9酶无法达到的效率编辑DNA序列。