1. 设计sgRNA（单导RNA）目标序列选择：选择靶基因的特定位点，确保附近有PAM（Protospacer Adjacent Motif）序列。设计sgRNA：根据靶基因的目标序列设计与其互补的sgRNA。可以使用在线工具（如CRISPR Design Tool）来设计和验证sgRNA序列。2. 构建CRISPR-Cas9表达载体 载体选择：选择合适的载体来表达Cas9蛋白和sgRNA。常用...
CRISPR(成簇规律间隔短回文重复序列)是细菌基因组中的一段特殊 DNA 序列,Cas9 是一种能够切割 DNA 双链的核酸内切酶。在基因编辑过程中,引导 RNA(gRNA)将 Cas9 引导至目标 DNA 序列位置,随后 Cas9 对目标 DNA 进行切割。 1.敲入(Knock - in)概念 基因敲入是一种将外源基因或经过修饰的基因序列精准插入基因组...
CRISPR(成簇规律间隔短回文重复序列)是细菌基因组中的一段特殊 DNA 序列,Cas9 是一种能够切割 DNA 双链的核酸内切酶。在基因编辑过程中,引导 RNA(gRNA)将 Cas9 引导至目标 DNA 序列位置,随后 Cas9 对目标 DNA 进行切割。 1.敲入(Knock - in)概念 基因敲入是一种将外源基因或经过修饰的基因序列精准插入基因组...
CRISPR - Cas9 是一种源自细菌免疫系统的基因编辑技术。CRISPR(成簇规律间隔短回文重复序列)是细菌基因组中的一段特殊 DNA 序列,Cas9 是一种能够切割 DNA 双链的核酸内切酶。在基因编辑过程中,引导 RNA(gRNA)将 Cas9 引导至目标 DNA 序列位置,随后 Cas9 对目标 DNA 进行切割。 1.敲入(Knock - in)概念 基因敲...
Cas9-Cell line Knock-In service（Cas9-CKI）基因定点敲入细胞系是Cas9X技术团队针对实验室常用的各种细胞系，研究并确立针对不同的细胞的外源基因或者片段高效敲入（Knock-in, KI）的技术操作规程，主要目的就是：解决KI效率低下和KI片段长度限制的问题。海星生物一站式解决细胞基因功能研究纯合/杂合敲入细胞系。超过...
2、基因敲入(Knock-in) 当DNA双链断裂后,如果有DNA修复模板进入到细胞中,基因组断裂部分会依据修复模板进行同源重组修复(HDR),从而实现基因敲入。修复模板由需要导入的目标基因和靶序列上下游的同源性序列(同源臂)组成,同源臂的长度和位置由编辑序列的大小决定。DNA修复模板可以是线性/双链脱氧核苷酸链,也可以是双链...
CRISPR-Cas9基因敲入系统(knock in)原理: CRISPR-Cas9基因敲入系统:Cas9内切酶切割双链DNA,同时DNA修复模板质粒(供体DNA分子)存在的情况下,生物体内启动HDR修复路径,按照提供的模板在修复过程中引入片段插入或定点突变。这样就可以实现基因的替换或者突变。 HDR机制可以通过同源重组将一段DNA序列插入切割位点。这种修复方式...
CRISPR/Cas9不仅能敲除基因,而且还能敲入基因(knock in)。它先利用Cas9蛋白在目的基因特定位置切割,然后以含待敲入序列的donor质粒为模板,通过同源修复(HDR)方式,引入点突变或者外源基因。常见的敲入基因如:在基因的N端或者C端插入GFP/Flag/Luciferase等序列监测内源基因的定位、表达和示踪,或者结合Cre-LoxP系统引入序列...
CRISPR-Cas9基因敲入系统(knock in) ☞实验原理: CRISPR-Cas9基因敲入系统是Cas9内切酶切割双链DNA,且有一段高度同源的DNA修复模板存在的情况下,生物体内启动HDR修复路径,将一段外源DNA定点插入基因内部。 同源性定向修复(HDR)途径,对比NHEJ修复途径,同源性定向修复(HDR)途径是更为精确的修复机制。 这种修复机制主要...
-, 视频播放量 61、弹幕量 0、点赞数 1、投硬币枚数 0、收藏人数 2、转发人数 0, 视频作者 生物奇迹biomiracle, 作者简介 获取更多科研文章,招聘信息,请关注公众号:生物奇迹biomiracle,相关视频:亚洲之子V70修复最终版本,安卓+PC+指令,超好玩的真人!!!IUJHSFDOIG