a) Cas9-GFP连接的表达不需要额外的步骤将人工靶位点克隆到替代报告质粒中。 b)转染的dsDNA总量减少。 在许多情况下,某些细胞类型对高剂量的dsDNA敏感,将替代报告质粒形式的额外dsDNA添加到现有的CRISPR和供体载体构建体中可导致细胞毒性。 c)通过Cas9-GFP mRNA、体外转录的gRNA和单链寡核苷酸(ssODN)可以选择使用“不...
质粒信息: pSaCas9_GFP哺乳编辑质粒 宿主分类:哺乳细胞质粒 启动子:CMV 分类:哺乳细胞质粒 质粒相关图谱、序列及其他内容可查询公司官司网 电话:17317861055 QQ:570992151 收到质粒干粉后请先短暂离心,再加入20ul dd
pACT1:Cas9-GFP, U6:sgTK 价格: ￥1000 编号:BNCC353593 形式:质粒干粉 交付:一至三天 品牌:BNCC 用途: 科研 加入购物车 查看购物车 基本信息 相关资源 pACT1:Cas9-GFP, U6:sgTK基本信息 培养基 酵母膏:5.0,蛋白胨:10.0,NaCl:10.0,pH:7.0(25℃) 生长条件 LB +氨苄青霉素,37℃(克隆菌株Stbl...
(一)整体策略 为了利用CRISPR/Cas9方法在红色毛癣菌中进行基因敲除,我们使用两种不同的质粒pCas9GFP(表达eGFP标记的Cas9核酸酶,Cas9GFP)和psgRNA5.0(表达基因特异性sgRNAs)来靶向pacC基因(Figure1)。本文设计了四种不同的sgRNA:与pacC外显子1互补...
，稀释密度一般为50~90个细胞/板（图7），若编辑效率达50%以上，推荐分两块96孔板即可，最终选取20-30个单克隆以得到成功敲除的细胞系；也可以将细胞铺到100mm皿里，一周后挑取单克隆（注：这种方法适合单细胞不易成活的细胞系，但是挑取的单克隆偶尔不纯，有时需要重新亚克隆）；若载体带有GFP等荧光标记，还...
使用TransIT-X2® Dynamic Delivery System (Mirus Bio) 或TransIT®-mRNA Transfection Kit (Mirus Bio)转染试剂将靶向PPIB的gRNA和编码Cas9的质粒(pCas9-GFP; MilliporeSigma)或mRNA(5-甲基胞苷和假尿苷修饰,TriLink BioTechnologies)共转染到几种不同的哺乳...
GFP荧光极其稳定，在激发光照射下，GFP抗光漂白能力比荧光素强，特别是在450～490nm蓝光波长下稳定。类...
(图7),若编辑效率达50%以上,推荐分两块96孔板即可,最终选取20-30个单克隆以得到成功敲除的细胞系;也可以将细胞铺到100mm皿里,一周后挑取单克隆(注:这种方法适合单细胞不易成活的细胞系,但是挑取的单克隆偶尔不纯,有时需要重新亚克隆);若载体带有GFP等荧光标记,还可以通过流式细胞仪直接分选,把单个细胞种到...
通过共转染含有eGFP报告基因的双链DNA模板和Cas9_gRNA #2质粒，尝试基因编辑，但流式细胞术检测显示敲入效率较低（GFP阳性细胞不足1%）。利用FACS富集了正确编辑的细胞，并经DNA序列分析确认了eGFP标签在内源性HBG1基因中的准确插入。为了提高敲入效率，研究人员在HUDEP2细胞中采用单链DNA模板和改进的Cas9-gRNA递送...
质粒准备:常用Cas9质粒,例如pSpCas9(BB)-2A-GFP (PX458)Addgene #75232 限制性内切酶:实验室常用限制性内切酶,BbsI核酸内切酶 仪器准备:流式分选,IncuCyte活细胞工作站 软件准备:Snapgene 比较贵的试剂主要集中在干细胞相关试剂:Lipofectamie Stem价格可达lipo3000的2.5~3倍;CloneR和电转试剂都比较贵;Incucyte可实时...