剂量实验的一个很好的起点是每0.5 ~ 100万个细胞中含有2-8 μg的CRISPR质粒。由于我们的单一载体包含一个由GFP连接的Cas9表达盒,在进行基因分型检测或单细胞克隆实验之前,可随后通过显微镜或FACS检测转染的细胞以监测转染效率(图1)。 图1.通过显微镜或FACS监测Cas9-GFP表达盒活性。 3.监测CRISPR双链断裂活性 ...
pACT1:Cas9-GFP, U6:sgTK-基本信息 培养基酵母膏:5.0,蛋白胨:10.0,NaCl:10.0,pH:7.0(25℃) 生长条件LB +氨苄青霉素,37℃(克隆菌株Stbl3,9981bp) 存储条件2-8℃ 安全等级0 操作步骤1.溶解: 收到质粒干粉后,请加入 20μl 无菌水至管底,溶解质粒,室温静置 1min; 2.混合(吸附质粒): 200μl 感受态细...
(一)整体策略 为了利用CRISPR/Cas9方法在红色毛癣菌中进行基因敲除,我们使用两种不同的质粒pCas9GFP(表达eGFP标记的Cas9核酸酶,Cas9GFP)和psgRNA5.0(表达基因特异性sgRNAs)来靶向pacC基因(Figure1)。本文设计了四种不同的sgRNA:与pacC外显子1互补...
最终选取20-30个单克隆以得到成功敲除的细胞系；也可以将细胞铺到100mm皿里，一周后挑取单克隆（注：这种方法适合单细胞不易成活的细胞系，但是挑取的单克隆偶尔不纯，有时需要重新亚克隆）；若载体带有GFP等荧光标记，还可以通过流式细胞
质粒信息: pSaCas9_GFP哺乳编辑质粒 宿主分类:哺乳细胞质粒 启动子:CMV 分类:哺乳细胞质粒 质粒相关图谱、序列及其他内容可查询公司官司网 电话:17317861055 QQ:570992151 收到质粒干粉后请先短暂离心,再加入20ul ddH2O 溶解质粒,然后转化进相应的感受态中,再挑取单菌落提取质粒(提供图谱 序列 测序报告 售后)暂时不使...
pLV3-U6-MCS-shRNA质粒载体 pET-61-DEST(低拷贝)质粒载体 pSIN-Neo质粒载体 PiggyBac-CMV-MCS-Hyg质粒载体 pCXUN-HA质粒载体 pRetroX-TetOne-Puro质粒载体 ppyCAG-MCS-IRES-Hyg质粒载体 pCMV6-EGFP-MCS-Myc-Neo质粒载体 pLV3-U6-MCS-sgRNA-Neo质粒载体 pCW57 MCS1-P2A-MCS2(GFP)质粒载体 pLV-EF1a-MCS...
GFP荧光极其稳定，在激发光照射下，GFP抗光漂白能力比荧光素强，特别是在450～490nm蓝光波长下稳定。类...
(图7),若编辑效率达50%以上,推荐分两块96孔板即可,最终选取20-30个单克隆以得到成功敲除的细胞系;也可以将细胞铺到100mm皿里,一周后挑取单克隆(注:这种方法适合单细胞不易成活的细胞系,但是挑取的单克隆偶尔不纯,有时需要重新亚克隆);若载体带有GFP等荧光标记,还可以通过流式细胞仪直接分选,把单个细胞种到...
名称编号规格价格手册 pSpCas9(BB)-2A-GFp (pX458)质粒DNA1-6969y2ug990元 英文名称: 运输:常温 保存:-20°C 有效期:两年 货期: 其他: 产品介绍: Order Online在线订购 订货信息 产品名称* 申请类型请选择类型产品订购试用索取* 套数* 推荐人
含绿色荧光蛋白(GFP)的慢病毒载体的构建 慢病毒载体介导成纤维细胞高效稳定表达绿色荧光蛋白 慢病毒介导的shRNA靶向干扰基因表达 大鼠基因RNA干扰慢病毒载体的构建 靶向PRL-3基因的shRNA慢病毒载体的构建 构建慢病毒载体 慢病毒载体质粒 慢病毒载体的骨架质粒合成 ...