Cas9和GFP蛋白编码区通过编码2A肽的小序列连接。2A肽是一种“自切割”肽,允许从一个转录中产生两个单独的蛋白质,并利用“核糖体跳跃”而不是蛋白水解切割机制产生两个单独的蛋白质。3,14 可根据常用方案收集细胞用于FACS。我们建议将细胞分为低、中、高GFP表达水平的组分。GFP表达最高的细胞群已被证明可以富集基...
分别用CRISPR/Cas9-GFP 1-1质粒和RNP复合物对MV4-11细胞、Kasumi-1细胞和CD34+细胞进行电穿孔,电穿孔参数根据上述方法。96小时后,细胞用台盼蓝染色,显微镜下计数。所有实验至少重复3次。 6.电泳迁移率测定法(EMSA): 纯化gRNA(1µg)和Cas9蛋白(1µg)在室温下孵育15分钟后,gRNA/ Cas9 RNP装载1.5%琼脂糖...
流式细胞术检测显示敲入效率较低(GFP阳性细胞不足1%),但FACS成功富集了正确编辑的细胞。DNA序列分析确认了eGFP标签在HBG1基因中的准确插入。为提高敲入效率,研究人员在HUDEP2细胞中采用单链DNA模板和改进的Cas9-gRNA递送方法(RNP代替质粒),将HiBiT标签引入Aγ-球蛋白C末端,使敲入效率提升至超过20%。蛋白免疫印迹分析...
Cas9零突变体GFP NLS蛋白(高浓度),Cas9 Null Mutant GFP NLS Protein (High Concentration)产品形式 生化试剂保存建议 蓝冰/冰袋运输保存在4℃/-20℃,若干冰运输保存在-80℃其他 Applied Biological Materials Inc(abm)公司是加拿大一家不断寻找用于生命科学研究和药物开发新产品的公司。众多的产品线全面涵盖了许多尖...
Gilbert等人(Gilbert Luke A et al.,2013)将dCas9与VP64融合蛋白,有效地激活了Gal4UAS-GFP的表达。此外,在特异靶向NTF3和VEGFA的单个或多个sgRNA的引导下,dCas9-VP64显著增加了基因的表达,表明该融合蛋白可以特异性地激活内源性人类基因的表达。dCas9-VP64是一种有效的CRISPR激活工具,已被广泛用于研究多基因...
Gilbert等人(Gilbert Luke A et al.,2013)将dCas9与VP64融合蛋白,有效地激活了Gal4UAS-GFP的表达。此外,在特异靶向NTF3和VEGFA的单个或多个sgRNA的引导下,dCas9-VP64显著增加了基因的表达,表明该融合蛋白可以特异性地激活内源性人类基因的表达。dCas9-VP64是一种有效的CRISPR激活工具,已被广泛用于研究多基因...
通过基因工程技术，绿色萤光蛋白(GFP)基因能转进不同物种的基因组，在后代中持续表达。现在，绿色萤光...
Cas9核酸酶GFP NLS蛋白(高浓度),Cas9 Nuclease GFP NLS Protein (High Concentration)产品形式 生化试剂保存建议 蓝冰/冰袋运输保存在4℃/-20℃,若干冰运输保存在-80℃其他 Applied Biological Materials Inc(abm)公司是加拿大一家不断寻找用于生命科学研究和药物开发新产品的公司。众多的产品线全面涵盖了许多尖端技术...
而在Nature Genetics,则是研究了Cas9蛋白过表达本身和p53蛋白激活关系,作者对大量的细胞系进行了Cas9过表达之后比较了它们转录水平的变化,最后找了p53这个值得关注的对象(为了尽量避免病毒感染和蛋白表达压力的影响,作者在对照组 中同样进行了空载体或GFP载体的感染)。
BLP:蓝色荧光蛋白。报告基因标识融合蛋白的亚细胞结构定位情况。 KRAB:Krüppel associated box。一类起转录抑制作用的“锌指”蛋白结构域。 CD:CRSPRi靶向“沉默”绿色荧光蛋白GFP基因的实验。 C:8种sgRNA配合dCas9与dCas-KRAB体系在稳定表达GFP的HEK293细胞系里功能验证实验。