案 例基因敲入案例项目概要：在 HEK293 细胞 VPS35 中敲入 GFP实验设计：在VPS35的碳端敲入GFP验证结果：在人类 VPS35 基因的 碳端已成功插入了 EGFP。点突变案例：项目概要：MEG-01 细胞中的 JAK2 基因点突变实验设计：设计gRNA靶向突变点位V617F GTC TTC验证结果：#4C7:AAGCAGCAAGTATGATGAGCAAGCTTTCTCA...
GFP MFI的顺序为未治疗>7天>2天>14天。这项研究的结果强调了LNPs作为GSCs体内基因编辑的非病毒递送工具的有效性。总结 这项研究强调了使用LNPs在原位GSCs肿瘤中实现高效体内CRISPR-Cas9介导基因的潜力,使用CRISPR RNA-LNP作为体内筛选工具有望发现GSCs特异性的新治疗靶点。与体外方法相比,在体内进行这些研究可以更准确...
最终选取20-30个单克隆以得到成功敲除的细胞系；也可以将细胞铺到100mm皿里，一周后挑取单克隆（注：这种方法适合单细胞不易成活的细胞系，但是挑取的单克隆偶尔不纯，有时需要重新亚克隆）；若载体带有GFP等荧光标记，还可以通过流式细胞
Gilbert等人(Gilbert Luke A et al.,2013)将dCas9与VP64融合蛋白,有效地激活了Gal4UAS-GFP的表达。此外,在特异靶向NTF3和VEGFA的单个或多个sgRNA的引导下,dCas9-VP64显著增加了基因的表达,表明该融合蛋白可以特异性地激活内源性人类基因的表达。dCas9-VP64是一种有效的CRISPR激活工具,已被广泛用于研究多基因...
Gilbert等人(Gilbert Luke A et al.,2013)将dCas9与VP64融合蛋白,有效地激活了Gal4UAS-GFP的表达。此外,在特异靶向NTF3和VEGFA的单个或多个sgRNA的引导下,dCas9-VP64显著增加了基因的表达,表明该融合蛋白可以特异性地激活内源性人类基因的表达。dCas9-VP64是一种有效的CRISPR激活工具,已被广泛用于研究多基因...
启动子:载体使用CAG启动子,这是一种强启动子,能够有效地驱动Cas9蛋白的表达。 Cas9蛋白:载体表达的是经过真核细胞密码子优化的Cas9蛋白,该蛋白在N端和C端分别带有核定位信号(NLS),确保Cas9能够进入细胞核。 2A序列:Cas9蛋白后接有2A序列,这是一种自切割肽序列,能够确保Cas9蛋白和下游的GFP蛋白在翻译过程中被分离...
Gilbert等人(Gilbert Luke A et al.,2013)将dCas9与VP64融合蛋白,有效地激活了Gal4UAS-GFP的表达。此外,在特异靶向NTF3和VEGFA的单个或多个sgRNA的引导下,dCas9-VP64显著增加了基因的表达,表明该融合蛋白可以特异性地激活内源性人类基因的表达。dCas9-VP64是一种有效的CRISPR激活工具,已被广泛用于研究多基因...
第12天将效应CAR T细胞或对照细胞(未修饰的细胞毒性T淋巴细胞(CTL) )解冻并接种到含有GFP标记的Nalm6靶细胞的96孔板中,效应与靶细胞(E:T)的比率范围为10:1至0:1。将E:T细胞混合物孵育6小时,并使用EVOS M5000成像系统和流式细胞仪...
其中一些称之为外泌体支架蛋白,可用于在EV生物发生过程中直接包装外源性蛋白。通过这些支架蛋白融合表达或相互作用方式,CRISPR/Cas9 RNP可以装载在EV表面或腔内。例如CD63 是EV膜表面高表达的四跨膜蛋白家族成员,其C端与 GFP 蛋白的融合表...