将制备好的pAAVCre/gRNA注射到2日龄(P2)Cas9转基因小鼠的硬膜下颅底部位(图 4A),每只小鼠注射约10 8 VG/ml病毒。对注射后存活的小鼠继续观察(1只小鼠因注射病毒而死亡)。注射2个月后,处死5只小鼠进行检测,观察颅底注射部位GFP荧光表...
GFP阳性分选细胞中mmu-miR-21a-5p表达水平显著降低,且观察到这些细胞基因组序列中断。通过Sanger测序和下一代测序(NGS)分析,验证基因组编辑的效果,包括indel的产生和脱靶效应的评估,结果显示SaCas9-KKH编辑在小鼠基因组中的脱靶效应最小,在预测的前5个脱靶位点中基于NGS分析显示出极少的修改读数。NGS分析显示,与CT-...
本研究以这几个基因为研究对象,利用CRISPR/Cas9构建小鼠肺腺癌模型(图2a),比较Stk11和Pten在结合Trp53缺失和Kras功能获得的肺癌中的作用。小鼠接种含有SKT的AAV病毒(图2c), 10周后检查肺。石蜡切片证实转基因小鼠的肺异常和Cas9/GFP表达...
将Cas9-GFP:Atp2b2-mut1:lipo2000注射到P1 Atp2b2Obl/+小鼠的内耳中。注射后4天,取角膜器官GFP阳性感觉上皮。在对含有Obl和WT等位基因的基因组区域进行DNA提取和PCR扩增后,进行扩增子测序分析,以评估编辑效率(图4上),结果显示,注射Cas9-GFP : Atp2b2-mut1:lipo2000溶液的Atp2b2Obl/+小鼠,在Obl位点上发生0.4...
该技术用CRISPR/Cas9构建针对特异基因片段的载体,比原有的ZFNS和TALENS手段更为简便、易操作,大大降低了基因组编辑技术的门槛,已经应用于人、小鼠、大鼠、斑马鱼、秀丽隐形线虫、植物及细菌等生物中。这一项具有划时代意义的新技术在短短几年的时间内就成为靶向基因组编辑的“标准工具”。随着研究的不断深入,CRISPR/...
GFP融合蛋白前为beta-Actin启动子,表达方式为全身表达,除红细胞和毛发外,其余细胞可以直接在激发光下看到荧光。小鼠表皮发绿,自然光下也可看到。 Rosa26-LsL-cas9-tdTomato红色荧光小鼠 Rosa26-LsL-cas9-tdTomato是红色荧光基因编辑工具小鼠。该小鼠与全身表达或组织特异表达Cre重组酶的品系交配后,将会在表达Cre的...
有意思的是，他们还发现MC3-cLNP 在任何浓度下（0.1 至 1.0 μg）都不会降低 GFP 表达。总结来说， L8-cLNP 在体外引起高效、特异性的基因编辑，并且在多种癌细胞系中毒性较低。图4：基于LNP有效递送Cas9 mRNA/sgRNA PLK1 是有丝分裂所需的激酶，缺乏它会导致分裂细胞中的 G2-M 期细胞周期停滞和细胞...
为了从转染的细胞库中分离出表达Cas9的细胞,GFP通过2A肽与Cas9核酸酶连接。使用这种方法,在三个基因组位点产生的平均插入缺失频率从富集前的11%增加到富集后的68%。尽管在富集的细胞池中存在大量的基因组编辑事件,但从脱靶预测然后进行深度测序均未观察到明显的脱靶效应。对富集的多重细胞进行单细胞分选,并对97个...
2020年11月18号,Dan Peer教授等在Science Advance发布文章:《CRISPR-Cas9 genome editing using targeted lipid nanoparticles for cancer therapy》,他们采用新型氨基电离脂质递送 Cas9 mRNA+sgRNA,在小鼠体内实现肿瘤基因编辑,抑制肿瘤生长,提高生存率。这种新型氨基电离脂质共同部分由亚油酸尾链(十八碳二烯酸)和氨基头部...