将Cas9-GFP:Atp2b2-mut1:lipo2000注射到P1 Atp2b2Obl/+小鼠的内耳中。注射后4天,取角膜器官GFP阳性感觉上皮。在对含有Obl和WT等位基因的基因组区域进行DNA提取和PCR扩增后,进行扩增子测序分析,以评估编辑效率(图4上),结果显示,注射Cas9-GFP : Atp2b2-mut1:lipo2000溶液的Atp2b2Obl/+小鼠,在Obl位点上发生0.4...
在肿瘤植入后第7天,小鼠颅内注射AAV8-GFP或PBS作为对照,然后在第14天处死小鼠,通过GFP基因表达水平来评估转导效率。与注射PBS对照的小鼠相比,注射AAV8-GFP的小鼠在肿瘤携带的左半球中GFP基因表达水平显著更高,而在非肿瘤的右半球中两组之间没有观察到显著差异。通过免疫荧光(IF)分析大脑以确定转基因表达,结果显示AA...
基因编辑处理的受精卵经体外培养至 2 细胞期,须将其植入同期发情小鼠的子官,才可获得表达 EGFP 的小鼠 C. 分离能表达 EGFP 的胚胎干细胞,通过核移植等技术可获得大量的转基因小鼠 D. 通过观察早期胚胎的荧光,能表达 E. GFP 的即为雄性小鼠胚胎 相关知识点: ...
目的·应用CRISPR/Cas9系统对小鼠间充质干细胞C3H10T1/2进行靶向Piezo1基因稳定敲除,探究Piezo1对间充质干细胞成骨分化能力的影响。 方法·根据CRISPR/Cas9原理,设计2条靶向Piezo1基因的单链指导RNA(single guide RNA,sgRNA),利用Lenti-...
GFP融合蛋白前为beta-Actin启动子,表达方式为全身表达,除红细胞和毛发外,其余细胞可以直接在激发光下看到荧光。小鼠表皮发绿,自然光下也可看到。 Rosa26-LsL-cas9-tdTomato红色荧光小鼠 Rosa26-LsL-cas9-tdTomato是红色荧光基因编辑工具小鼠。该小鼠与全身表达或组织特异表达Cre重组酶的品系交配后,将会在表达Cre的...
该技术用CRISPR/Cas9构建针对特异基因片段的载体,比原有的ZFNS和TALENS手段更为简便、易操作,大大降低了基因组编辑技术的门槛,已经应用于人、小鼠、大鼠、斑马鱼、秀丽隐形线虫、植物及细菌等生物中。这一项具有划时代意义的新技术在短短几年的时间内就成为靶向基因组编辑的“标准工具”。随着研究的不断深入,CRISPR/...
•独有的CRISPR位点设计最大限度降低脱靶效率,适用于人、小鼠、大鼠等多个物种,并提供个性化定制。 •通过2A肽策略使GFP或RFP与Cas9共表达,可追踪转染效率和通过FAC筛选富集阳性细胞,大大简化流程。 Cas9-D10A双切口酶系统 经过改造的Cas9-D10A双切口酶系统,配合使用一对gRNA,分别在相对的两条DNA链上产生切口,...
由于CRISPR/Cas9的基因编辑效率随目标而异,他们检验了小鼠中的两个基因。对于这两个基因,他们在注射1周后都观察到插入/缺失的形成和表型的变化。小鼠肝脏在组织学上表现正常,与AAV-GFP对照相比,肝损伤标志物也没有增加。AAV-SaCas9-sgRNA不仅介导了基因组修饰,也没有引起明显的免疫应答。
LSL-Cas9-EGFP成年鼠随机分为GFP病毒注射组(CON组)和AAV-Cre病毒注射组(KO组)。用戊巴比妥钠60~80 mg/kg腹腔注射麻醉成年小鼠。将小鼠两侧外耳道及牙齿固定在脑立体定向仪(Stoelting公司,美国),常规备皮消毒后进行头部剪毛,剪去表层皮肤暴露前囟并标记前囟位置。根据坐标点调整好钻孔位置,确立右侧纹状体坐标:前囟后...