植株ꎬ经分子鉴定发现已成功实现 Cas9~Free 且植株白化ꎮ 本研究成功构建了一种带有荧光筛选标记且可实现拟南芥 ALB3 基因敲除的CRISPR/ Cas9 载体ꎬ并获得 Cas9~Free 的纯合突变植株ꎬ为拟南芥基因高效编辑载体的构建以及 Cas9~Free 基因编辑后代的获得提供了借鉴与参考ꎮ关键词:CRISPR/ Cas9ꎻALB3 基因...
该双功能筛选方法包括五个步骤(图3):(1)构建包含dTvDAO报告基因和共表达Cas9/gRNAs的双元载体;(2)农杆菌介导的拟南芥遗传转化;(3)使用5 mMD-serine正向筛选获得T1代转基因苗;(4)Sanger测序靶基因扩增子以确认存活T1植株中的多基因编...
Niyogi课题组题为"Multiplexed CRISPR-Cas9 mutagenesis of rice PSBS1noncoding sequences for transgene-free overexpression"的最新研究论文。报道了该研究小组通过CRISPR/Cas9工具编辑植物中自然存在的参与光保护过程的基因来改变光合作用。 研究人员通过对水稻PSBS1基因上游的非编码序列进行了多重CRISPR-Cas9诱变,借助...
研究人员以控制穗发芽抗性、氮吸收利用、株型、支链淀粉合成和磷转运的6个基因作为靶基因,分别构建同时靶向2个、3个、4个和5个基因组合的多基因编辑载体,以黄淮麦区大面积种植的小麦品种郑麦7698为受体材料,实现15个基因组位点同时编辑,...
6月7日,Science Advances在线发表美国加州大学伯克利分校植物与微生物生物学系Krishna K. Niyogi课题组题为"Multiplexed CRISPR-Cas9 mutagenesis of ricePSBS1noncoding sequences for transgene-free overexpression"的最新研究论文。报道了该研究小组通过CRISPR/Cas9工具编辑植物中自然存在的参与光保护过程的基因来改变光合...
Nat Biotechnol:植物育种新突破，可移动CRISPR/Cas9基因编辑技术 2023年01月03日， Nature Biotechnology 在线发表了来自马克斯·普朗克分子植物生理学研究所（MPIMP）Friedrich Kragler课题组题为“Heritable transgene-free genome editing in plants by transfer of Cas9 and gRNA transcripts from transgenic donor ...
由于葡萄无性繁殖的特点,利用位点特异性重组酶(site-specific recombinases)或原生质体等系统获得非转基因(transgene-free)编辑植株,可能是未来研究的一个重要方向和要求。 图2 葡萄基因编辑流程图 中国科学院植物研究所梁振昌研究员为论文通讯作者,助理研究员任冲为第一作者。该研究得到国家自然科学基金青年基金和宁夏...
在T1代发生纯合编辑以及双等位编辑的株系中选择了无红光种子进行繁种,并对T2代植株编辑情况进行测序检测,结果发现T1代中的突变成功遗传到了T2代无Cas9株系中。【结论】pRSE-WH在拟南芥中展现了极高的编辑效率,并且通过对种子进行红色荧光筛选,能够简便地获得无Cas9且稳定遗传的T3代突变体。 关键词: 拟南芥, ...
(17) 获得转基因T0植株的打靶效果检测:打靶成功的转化体往往在靶点产生单碱基插入或者缺失若干碱基。以靶点为中心,在两侧各离开约200-300 bp处合成引物PCR扩增。关键点:在靶点上游约150-250bp处设计内部引物为测序引物(这个距离的测序质量最好,但不要少于100bp和不要大于400bp),对PCR产物直接测序(不要用PCR扩增...
Wang等[19]利用RNAi技术, 获得干涉FAD2基因转基因植株, 并发现转基因大豆油酸含量高达71.5%~81.9%。Zhang等[20]和Yang等[21]分别通过RNAi技术, 获得油酸含量为51.71%和27.38%~80.42%的干涉FAD2-1B基因转基因大豆。Haun等[22]利用人工核酶技术定点突变大豆FAD2-1A和FAD2-1B基因, 获得油酸含量高达80%的转基因...