• Cas9 mRNA:瞬时表达Cas9蛋白 riboEDIT Cas9 mRNA为体外转录生成,采用优化的加帽技术可实现高效且经济的共转录加帽以生成Ribo-Cap1结构,从而提高mRNA活性并降低免疫原性。此外,还针对IVT mRNA结构元件(5’UTR、3’UTR、编码区和poly A尾)进行了优化,使得优化后的mRNA结构系统地提高了其胞内稳定性和翻译效率。
在特异性标记HUDEP细胞系中内源性HBG1基因的初步尝试中，研究人员在HUDEP1细胞中评估了CRISPR-Cas9介导的基因标记可行性。通过共转染含有eGFP报告基因的双链DNA模板和Cas9_gRNA #2质粒，尝试基因编辑，但流式细胞术检测显示敲入效率较低（GFP阳性细胞不足1%）。利用FACS富集了正确编辑的细胞，并经DNA序列分析确认了eG...
EGFP mRNA:用于转染对照,检测转染效率 结果示例:riboEDIT™ CRISPR-Cas9 mRNA与RNP体系编辑效率 应用领域 本体系可用于哺乳动物细胞的基因编辑,如肿瘤细胞、干细胞(动物胚胎干细胞、多功能干细胞、造血干细胞等)、原代细胞、祖细胞、细胞治疗(CAR-T)、动物模型(受精卵)等,适合进行单/多基因敲除/插入、细胞改造、构...
④ 吉赛生物circRNA现货产品翻译效率高 GSPure® Circ-eGFP和GSPure® Circ-mCherry分别转染293T细胞,在多个时间点于荧光显微镜下观察荧光,可见荧光信号强且稳定,蛋白翻译表达水平优于线性mRNA。 图9. GSPure® Circ-eGFP转染293T细胞后荧光检测结果(放大倍数:100×) 图10. GSPure® Circ-mCherry转染293T...
此外,研究者利用RNA干扰技术,将合成的EcILP-dsRNA注射到成年脊尾白虾体中,同时将EGFP基因的dsRNA和PBS作为阴性和空白对照注射,并通过预实验确定了ds-EcILP的最佳干扰剂量。每4d注射一次,距离第一次注射15d后检测敲降效率及生长指标,以研究...
基于在mRNA制备方面的开创技术和丰富经验,耀海生物可为全球客户提供mRNA一站式制备服务,涵盖mRNA小样制备、工艺开发、分析方法开发、LNP制剂开发、GMP生产、无菌灌装与放行检测。案例分享: eGFP mRNA和mCherry mRNA在293T细胞中实现高表达 耀海生物还提供各种预制型质粒模板(质粒+菌液)、以及IVT mRNA产品(原液/冻干粉...
Cas9的C端加上T2A标签,标签后可接EGFP(增强绿色荧光蛋白)或其他筛选基因,让Cas9和标签非融合表达。T2A可将Cas9蛋白的表达和EGFP断开。EGFP可用于指示质粒转染的成功。2A是一个断裂信号,但断裂并不是百分之百的。 U6启动子引导了sgRNA的表达,紧接着CBV启动子联合Kozak序列,使得Cas9在脊椎动物中表达,sgRNA和Cas9在...
图1CRISPR/Cas9介导外源基因eGFP插入鸡EAV-HP位点示意图(A:供体载体结构示意图;B:供体载体整合至鸡基因组原理示意图) Fig. 1 Schematic diagram of CRISPR/Cas9-mediated foreign gene targeted knock-in into the chicken genomic EAV-HP lo...
对基因组进行基因编辑,首先需要确定我们要进行的基因编辑类型,基因编辑类型一般包括敲除,敲入,修饰和点突变。CRISPR/Cas9 基因编辑需要在细胞核内存在含有靶点gRNA及Cas9 蛋白形成的RNP 复合体。可以选择基因编辑质粒载体、病毒、体外转录gRNA 和Cas9 mRNA、化学合成gRNA和表达纯化的Cas9 蛋白。如图: ...
N-豆蔻酰化促进了Cas9/sgRNA-eGFP封装到EV中 由于豆蔻酰化蛋白与质膜的关联,该研究探讨了蛋白豆蔻酰化是否可用于将Cas9封装到EV中。研究证明了豆蔻酰化蛋白优先富集在EV中。源自Src激酶的八肽与Cas9蛋白N端的融合促进了其封装到EV中。涂有VSV-G并封装修饰的Cas9/sgRNA-eGFP的EV以高达42%的效率敲除HEK293T-eGFP细...