从Addgene网站购买pX330质粒(http://.addgene/42230/)。 选择针对目的基因的CRISPR/Cas9靶点,具体设计原则见 http://.genome-engineering/crispr/?page_id=23。 实验步骤 1合成下图形式的gRNA靶点特异性的两条引物 对引物首先进行磷酸化处理: 1uloligo1(100 ...
CRISPR/Cas9系统的工作原理是crRNA (CRISPR-derived RNA) 通过碱基配对与 tracrRNA (trans-activating RNA) 结合形成tracrRNA/crRNA 复合物,此复合物引导核酸酶 Cas9 蛋白在与 crRNA 配对的序列靶位点处剪切双链 DNA,从而实现对基因组DNA序列进行编辑;而通过人工设计这两种 RNA,可以改造形成具有引导作用的gRNA (guide...