是签解决CRISPR/Cas9 系统的脱靶问题的一个多重来源。 二、CRISPR/Cas9 系统的脱靶效应的检测技术 1. 靶向测序技术 靶向测序技术是目前用亍检测CRISPR/Cas9 系统脱靶效应最常用的技术,其基本原理 是通过高通量测序技术对基因组DNA 迚行扫描,寻找Cas9 酶靶向RNA 和非靶向DNA 之间的“匹配”序列。这种技术因其高效、具有
最后,研究人员将体外转录的Cas9-MMLV的mRNA和pegRNA通过显微注射的方式,递送入小鼠受精卵中,一段时间后收集小鼠胚胎检测脱靶编辑情况。这个实验验证了PEAC-seq在体内基因编辑场景中也可以被安全的用于检测脱靶位点(图4)。 Figure PEAC-seq in vivo ...
因此,迫切需要一种程序,能够快速识别打靶和脱靶效应的相对频率,从而有助于初始阶段的分析,可让我们消除打靶/脱靶事件比率较低的候选克隆。 这项研究表明,荧光原位杂交(FISH)——广泛用于诊断和基因组研究的一种细胞遗传学技术,是检测CRISPR/Cas9基因编辑结果的很好工具。该方法可以应用于基因编辑分析的初始步骤,可以直接...
此外，研究还发现，选择目标位点和使用高度特异的CRISPR-Cas9核酸酶可以在很大程度上避免真正的染色体易位。
一种检测CRISPR-Cas9脱靶效应的方法 (57)摘要 本发明公开了一种检测CRISPR‑Cas9脱靶 效应的方法,属于基因工程技术领域,其步骤包 括:a.采用软件预测sgRNA的脱靶位点,并获得 PCR扩增引物;b.选取基因样本,所选基因样本 包括基因编辑样本和未进行基因编辑样本;c.PCR ...
该论文全面系统地评估了现有CRISPR/Cas9基因编辑系统中全基因组脱靶位点的检测技术以及预测算法,并使用人工智能集成学习模型系统整合现有脱靶预测工具,开发了用于CRISPR基因编辑系统的集成脱靶预测平台iGWOS(integrated Genome-Wide Off-target cleavage Search platform),实现了更为准确的CRISPR全基因组范围类脱靶分布预测,为...
1.一种检测CRISPR-Cas9脱靶效应的方法,其特征在于,其包括以下步骤:a.预测sgRNA的脱靶位点,并获得PCR扩增引物;b.选取基因样本,所述基因样本包括基因编辑样本和未进行基因编辑样本;c.对步骤(a)预测出的脱靶位点进行PCR扩增;d.对步骤(c)所得的PCR产物进行高通量测序;e.结果分析,序列比对。 2.根据权利要求1所述的...
Research Progress on Off-target Effects and Detection Techniques in CRISPR/Cas9 Systems ZHANG Chen, LEI Zhan, LI Kai, SHANG Ying, XU Wen-tao 生物技术通报 . 2020, (3): 78 -87 . DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2019-0871 网站版权 © 《生物技术通报》编辑部 地址:北京市中关村南大街...
本发明公开了一种检测CRISPR‑Cas9脱靶效应的方法,属于基因工程技术领域,其步骤包括:a.采用软件预测sgRNA的脱靶位点,并获得PCR扩增引物;b.选取基因样本,所选基因样本包括基因编辑样本和未进行基因编辑样本;c.PCR扩增预测出的脱靶位点;d.对PCR产物进行高通量测序;e.结果分析,序列比对;本发明根据指定的比对规则,将所...
本发明公开了一种检测CRISPR‑Cas9脱靶效应的方法,属于基因工程技术领域,其步骤包括:a.采用软件预测sgRNA的脱靶位点,并获得PCR扩增引物;b.选取基因样本,所选基因样本包括基因编辑样本和未进行基因编辑样本;c.PCR扩增预测出的脱靶位点;d.对PCR产物进行高通量测序;e.结果分析,序列比对;本发明根据指定的比对规则,将所...