后续的生化实验也证实了这一点，这为 Cas7-11 系统的高效体内递送指明了方向。接下来的生化实验和结构结果表明：Csx29 蛋白酶确实能和 Cas7-11 效应蛋白直接结合。而且靶标 RNA 结合之后，Csx29 蛋白酶会发生构象变化，由抑制状态变为激活状态，预示着蛋白酶的活性很有可能得到发挥，并对靶标蛋白进行切割。因此...
因此，作者研究了每个辅助基因，发现删除Csx29能够恢复对MS2的干扰活性，且重新补救Csx29又降低了干扰（图1f、g）。可编程Cas7-11的体外切割反应 作者将纯化的DiCas7-11蛋白与靶向MS2ssRNA片段5'-或3'-的crRNA一起孵育，并观察到两个位点的切割（图2a），这些位点靠近结合位点的3'端并相隔5-6nt。不同位置的靶...
后续的生化实验也证实了这一点,这为 Cas7-11 系统的高效体内递送指明了方向。 接下来的生化实验和结构结果表明:Csx29 蛋白酶确实能和 Cas7-11 效应蛋白直接结合。 而且靶标 RNA 结合之后,Csx29 蛋白酶会发生构象变化,由抑制状态变为激活状态,预示着蛋白酶的活性很有可能得到发挥,并对靶标蛋白进行切割。 因此...
与单独的DiCas7-11相比,在大肠杆菌中表达完整的D.ishimotoniiCRISPR基因座降低了对MS2的干扰。因此,作者研究了每个辅助基因,发现删除Csx29能够恢复对MS2的干扰活性,且重新补救Csx29又降低了干扰(图1f、g)。 可编程Cas7-11的体外切割反应 作者将纯化的DiCas7-11蛋白与靶向MS2ssRNA片段5'-或3'-的crRNA一起孵育,并...
接下来的生化实验和结构结果表明:Csx29 蛋白酶确实能和 Cas7-11 效应蛋白直接结合。 而且靶标 RNA 结合之后,Csx29 蛋白酶会发生构象变化,由抑制状态变为激活状态,预示着蛋白酶的活性很有可能得到发挥,并对靶标蛋白进行切割。 因此,该系统可能同时兼具核酸酶与蛋白酶活性,并暗示着一种新型抵抗噬菌体侵染的机制。
Disclosed are methods of RNA-triggered protein cleavage by the CRISPR Cas7-11-Csx29 complex. A guide RNA specifically hybridizes to a RNA target, and Csx29 cleaves Csx30 when Cas7-11:Csx29 complex binds to the target RNA.
However, future structural and functional studies of the relatives of the Cas7-11 family, such as Cas7x3, and the putative binding partners, such as the Csx29 TPR-CHAT protease, will be required for our mechanistic understanding of the type III-D and III-E CRISPR-Cas systems and their ...
f, In vitro cleavage of MS2 ssRNA at 37 °C with varying concentrations of DiCas7-11 incubated with a crRNA against the target with and without Csx29 protein. MS2 ssRNA target is 5′ labelled with Cy5. Cleavage bands are marked by asterisks. g, Protospacer flanking site (PFS) sequence...
接下来的生化实验和结构结果表明:Csx29 蛋白酶确实能和 Cas7-11 效应蛋白直接结合。 而且靶标 RNA 结合之后,Csx29 蛋白酶会发生构象变化,由抑制状态变为激活状态,预示着蛋白酶的活性很有可能得到发挥,并对靶标蛋白进行切割。 因此,该系统可能同时兼具核酸酶与蛋白酶活性,并暗示着一种新型抵抗噬菌体侵染的机制。
因此,作者研究了每个辅助基因,发现删除Csx29能够恢复对MS2的干扰活性,且重新补救Csx29又降低了干扰(图1f、g)。 可编程Cas7-11的体外切割反应 作者将纯化的DiCas7-11蛋白与靶向MS2ssRNA片段5'-或3'-的crRNA一起孵育,并观察到两个位点的切割(图2a),这些位点靠近结合位点的3'端并相隔5-6nt。不同位置的靶位点...