通常,我们需要确保crRNA中的大部分核苷酸与靶标DNA序列的3'端区域进行配对,同时也要留出部分核苷酸与5'端的保护序列进行配对。这样,cas12a酶就可以准确地将目标DNA序列切割在正确的位置上。综上所述,cas12a的crRNA设计是一个综合考虑的过程,需要在保持crRNA的稳定性和匹配效率的同时,确保其能够准确地切割靶标DNA序列...
一．设计Cas12a-crRNA引物的关键因素：PAM对于crRNA引物和靶标序列的识别非常重要，因为Cas12a蛋白识别dsDNA靶标始于PAM序列的识别，从而促进dsDNA靶标的展开，PAM序列是TTTV序列，位于crRNA序列的5’端。对于许多初次接触CRISPR技术的小白很多可能不太了解PAM以及其作用是什么，而PAM基序对于CRISPR/Cas检测至关重要，本文...
在CRISPR检测一管法反应中，恒温扩增反应与Cas酶对靶标的切割反应同时发生，形成竞争关系。次优PAM的使用减慢了Cas酶对靶标的识别速度，从而减缓了切割反应，促进扩增反应的进行，使得在较低浓度下也能检测到靶标。总结而言，次优PAM在Cas12a检测中具有显著的高效性。在设计crRNA引物时，除了考虑次优PAM...
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