用非病毒载体电穿孔细胞是一种成本比较低的基因转移方法，但安全性和有效性仍在评估中。一些CAR-T细胞的制造现在包括CRISPR Cas9或转录激活物样效应核酸酶(TALENs) 的基因编辑，它可以与腺相关病毒载体结合使用，将CAR-T细胞整合到一个特定的位点。接下来就是构建好的T细胞在离体的条件下进行扩增然，最终的细胞产物需...
为了更便捷、准确地定量检测来源于HIV-1 型慢病毒载体技术制备的CAR-T/TCR-T细胞基因组中CAR 基因拷贝数,BlueKit推出了一款《CAR基因拷贝数检测试剂盒》(货号:HG-CA001),该试剂盒基于多重荧光探针PCR法,检测转移质粒上与整合或表达功能相关的DNA 序列和人体细...
实现CAR在T细胞上的表达,是CAR-T生产的核心技术,这一步需要利用到载体将CAR基因导入T细胞。常用的载体包括病毒载体和非病毒载体,病毒载体如逆转录病毒和慢病毒,逆转录病毒转染较稳定、效率高,如 Yescarta和Tecartus;慢病毒需大量质粒DNA进行瞬时转染,但安全性较高,如Kymriah。 非病毒载体转染主要有基因编辑技术和电穿孔。
简单来说,CAR-T治疗过程为包括从病人外周血中分离淋巴细胞T细胞,通过基因载体将肿瘤抗原特异性CAR基因转导入T细胞,生成CAR-T细胞,经体外扩增达到一定数量后静脉回输给患者。由于被转录的CAR基因编辑的功能,回输的CAR-T可以特异性结合癌症细胞,从而达到靶向治疗的作用。...
在生产CAR-T的环节中，CAR基因的转导是制备CAR-T的关键，载体的导入效率影响着CAR-T产品的成本和产量...
该研究团队将靶向TRBC1和TRBC2(编码T细胞受体β链)、CD7和CD52 mRNA的3个单向导RNA(sgRNA)与编码coBE的mRNA,通过电穿孔的方式送入健康捐赠者的T细胞中,并接着使用编码CAR的慢病毒载体转染这些细胞,从而生成碱基编辑的靶向CD7的CAR(BE-CAR7)-T细胞库,用以治疗复发性或难治性T细胞急性淋巴细胞白血病(T-ALL)儿童患...
CAR-T细胞治疗采用的是患者自体来源的细胞回输技术, 避免了移植物抗宿主病等疾病。 近年来,美国多项临床试验数据证实, 恶性肿瘤的CAR-T细胞治疗是一项安全有效的生物治疗技术。 针对CAR-T细胞所用载体长达192人·年的安全性观测结果显示, 载体是非常安全的。
逆转录病毒和慢病毒载体是CAR T细胞生产中最常用的基因传递方法,约占41%和在所有制成品中分别占54%。转导效率通常很高,需要T细胞激活才能进行基因转移。 使用“睡美人”(SB)或PiggyBac转座子/转座酶技术进行非病毒基因递送比病毒载体便宜得多。由于基因整合的随机性存在插入诱变的风险,但据认为效率比病毒载体要低。
纯度:检测载体和杂质量; 定量:p24蛋白分析和病毒RNA检测; 生物活性:目标细胞转染的效率测定。 CAR-T生产车间实例 CAR-T车间一般包括生产单元、储存单元、质控检测单元等,CMO公司还会有技术转移单元。下图即MaSTherCell公司的CAR-T生产车间平面图,整个车间的建筑面积为600㎡。