通过比较GFP荧光强度发现，CAR-T细胞具有更强的裂解肿瘤团块的能力，并且这群CAR-T细胞对肿瘤的裂解和杀伤具有很强的特异性。在患者中，CAR-T细胞疗法常常伴随着外周血中促炎细胞因子水平的增加。研究人员发现，当存在肿瘤聚集体时，与对照组T细胞相比，细胞因子IL-2、IL-6、TNF-α、IFN-γ和丝氨酸蛋白酶颗粒酶B...
GFP是从水母 Aequorea victoria 中提取的天然蛋白质,能够在紫外光或蓝光的激发下发出明亮的绿色荧光,被广泛用于细胞标记和追踪。通过将GFP基因包装到Lentivirus中,研究人员能够转导GFP进入体外实验中的目标细胞基因,实时监测目标细胞,并通过荧光显微镜进行可视化分析。mCherry是一种红色荧光蛋白,广泛应用于双标记实验中,尤其...
Incucyte 高通量活细胞分析系统具有无需取出细胞、无需同位素或抗体标记、免清洗、提供图像证据等优点,因此分析期间不需要进行任何的操作,实验结束后通过软件分析的Total integrated GFP intensity进行杀伤活性分析。 针对Nalm6靶细胞CAR-T以及过表达c-Jun的CAR-T细胞都表现出很好的杀伤活性,但是在低表达靶抗原的Nalm6-F...
产生GPC3 CAR-T细胞,并在Th1-或Th9极化条件下扩增14天。(a)在CD3+细胞群体(n=4个供体)中计算CAR(GFP)表达(百分比)。(b)代表性流程图(左图)和汇总数据(右图;n=4个供体),显示了GPC3 CAR-T细胞中IL9的表达。对GFP+CD3+CD8+或GFP+CD3+ CD4+ T细...
在8天的芯片培养期间,CAR-T细胞持续存在于肿瘤团块内部/表面,而对照T细胞最终大部分从肿瘤团块中被排除。通过比较GFP荧光强度发现,CAR-T细胞具有更强的裂解肿瘤团块的能力,并且这群CAR-T细胞对肿瘤的裂解和杀伤具有很强的特异性。 在患者...
为了进一步找寻机制,作者将脑切片进行T细胞(GFP),肿瘤细胞(GBM6),cleaved-caspase3染色,利用TG公司的Tissue Fax系统对脑部切片进行了全景组织扫描,发现T细胞的启动和杀伤在空间上仅仅局限于胶质细胞肿瘤内,从组织原位上观察到T细胞的分布情况,这体现了组织原为验证的必要性,极大的增强了文章的可信度。
Du S-H等使用DELFIA EuTDA细胞毒性试剂、Raji和Daudi细胞，比较了多种抗CD19 CAR分子的CAR-T细胞的杀伤功能。如下图，相对于对照组Mock和GFP CAR-Ts，几乎所有CAR分子均使得杀伤率显著增加。证明了将CAR-T添加到T细胞亚群和提高细胞杀伤能力是有效的。Copyright: Du S-H, Li Z, Chen C, Tan W-K, Chi Z,...
GFP是从水母 Aequorea victoria 中提取的天然蛋白质,能够在紫外光或蓝光的激发下发出明亮的绿色荧光,被广泛用于细胞标记和追踪。通过将GFP基因包装到Lentivirus中,研究人员能够转导GFP进入体外实验中的目标细胞基因,实时监测目标细胞,并通过荧光显微镜进行可视化分析。mCherry是一种红色荧光蛋白,广泛应用于双标记实验中,尤其...
CAR-T细胞构造另一重要环节是转染CAR至T细胞内。转染用质粒常带有标记基因如GFP、RFP等，通过EXFLOW流式检测荧光信号可量化细胞的转染效率[9]。图7：流式检测CAR经慢病毒转染至T细胞的转染效率（左：未转染T细胞；中：健康患者T细胞转染效率；B-ALL患者T细胞转染效率）[9]6、CAR-T细胞质量检测 当CAR-T细胞构建...
使用逆转录病毒转导CAR-'ve的小鼠T细胞(避免CAR的潜在影响),在MOI值为0.3,1和3负载VSVΔM51-GFP和vvDD-GFP Murine (图1a)。作者预实验发现,VSVΔM51-GFP和 vvDD-GFP负载改造的T细胞在MOI值为3时在肿瘤靶标上的沉积水平最高,以及重复性相对要高(图1a)。在用慢病毒改造的人T细胞测试得出了相同的结果,即...