GFP是从水母 Aequorea victoria 中提取的天然蛋白质,能够在紫外光或蓝光的激发下发出明亮的绿色荧光,被广泛用于细胞标记和追踪。通过将GFP基因包装到Lentivirus中,研究人员能够转导GFP进入体外实验中的目标细胞基因,实时监测目标细胞,并通过荧光显微镜进行可视化分析。mCherry是一种红色荧光蛋白,广泛应用于双标记实验中,尤其...
图1常见的CARs的高基底信号诱发的CAR-T耗竭 为了建立一个检测方法来量化CAR基底信号的强度,在Jurkat细胞中表达了含有GFP的CAR构建体,测量CD69的上调作为CAR信号诱导激活的读数。通过GFP的表达计算标准化的CD69表达水平,进一步定义每个样本的“基底信号指数”。GD2.CAR和CSPG4.CAR是两种已知的具有高基底信号的CAR,而C...
图1. EcN介导的CAR-T靶向杀伤肿瘤示意图。在体外测试中，该系统表现出对人类不同癌细胞系的细胞毒性，为了测试其在体内的效果，作者在递送GFP CAR-T细胞48小时前，对荷瘤免疫缺陷（NSG）小鼠单次瘤内注射携带ProTag的或对照菌株，仅ProTag菌株能介导有效的抗肿瘤反应，显著减缓肿瘤生长并提高小鼠生存率，且未产生...
综上所述,CAR识别可溶性配体(生理学和疾病中不同类别的生物标志物)可以大大拓宽CAR-T细胞在疾病治疗中的用途。在这项研究中,研究人员证明CAR-T细胞可以被设计为对各种可溶性配体(包括CD19胞外域,GFP变体和TGF-β)的强烈响应。此外,该研...
通过比较GFP荧光强度发现，CAR-T细胞具有更强的裂解肿瘤团块的能力，并且这群CAR-T细胞对肿瘤的裂解和杀伤具有很强的特异性。在患者中，CAR-T细胞疗法常常伴随着外周血中促炎细胞因子水平的增加。研究人员发现，当存在肿瘤聚集体时，与对照组T细胞相比，细胞因子IL-2、IL-6、TNF-α、IFN-γ和丝氨酸蛋白酶颗粒酶B在...
CAR-T细胞构造另一重要环节是转染CAR至T细胞内。转染用质粒常带有标记基因如GFP、RFP等，通过EXFLOW流式检测荧光信号可量化细胞的转染效率[9]。图7：流式检测CAR经慢病毒转染至T细胞的转染效率（左：未转染T细胞；中：健康患者T细胞转染效率；B-ALL患者T细胞转染效率）[9]6、CAR-T细胞质量检测 当CAR-T细胞构建成功...
GFP是从水母 Aequorea victoria 中提取的天然蛋白质,能够在紫外光或蓝光的激发下发出明亮的绿色荧光,被广泛用于细胞标记和追踪。通过将GFP基因包装到Lentivirus中,研究人员能够转导GFP进入体外实验中的目标细胞基因,实时监测目标细胞,并通过荧光显微镜进行可视化分析。mCherry是一种红色荧光蛋白,广泛应用于双标记实验中,尤其...
为了进一步找寻机制,作者将脑切片进行T细胞(GFP),肿瘤细胞(GBM6),cleaved-caspase3染色,利用TG公司的Tissue Fax系统对脑部切片进行了全景组织扫描,发现T细胞的启动和杀伤在空间上仅仅局限于胶质细胞肿瘤内,从组织原位上观察到T细胞的分布情况,这体现了组织原为验证的必要性,极大的增强了文章的可信度。
Incucyte® 高通量活细胞分析系统具有无需取出细胞、无需同位素或抗体标记、免清洗、提供图像证据等优点,因此分析期间不需要进行任何的操作,实验结束后通过软件分析的Total integrated GFP intensity进行杀伤活性分析。 针对Nalm6靶细胞CAR-T以及过表达c-Jun的CAR-T细胞都表现出很好的杀伤活性,但是在低表达靶抗原的Nal...
与传统的电穿孔(BEP)相比，ENI平台的CAR转染率几乎提高了3倍，报告基因GFP的表达显著增加(43.3%比16.3%)。通过与靶淋巴瘤Raji细胞共培养，我们证明了ENI基因转导的CAR-T细胞能够有效地抑制淋巴瘤细胞的生长(86.9%的细胞毒)。综上所述，结果表明该平台具有产生功能强大且有效的抗淋巴瘤CAR-T细胞的能力。鉴于基于...