car-nk细胞构建流程 1.确定目标基因:通过文献研究或基因组测序技术,选取感兴趣的基因作为目标。 2.设计引物:根据目标基因的序列设计合适的引物,通常需要设计两对引物,分别用于扩增目标基因的两段特定区域。 3. PCR扩增:使用设计的引物进行PCR扩增,得到目标基因的DNA片段。 4.克隆目标基因:将PCR扩增得到的目标基因...
CAR-NK就是利用基因工程给NK细胞加入一个能识别肿瘤细胞,并且同时激活NK细胞杀死肿瘤细胞的嵌合抗体。嵌合抗原受体能显著提高NK细胞疗效特异性。这个思路和CAR-T的构建类似:CAR包括胞外的识别结构域(如scFv)识别肿瘤特异性抗原;一个跨...
目前,在原代CAR-NK细胞中,CD8α和CD28来源的跨膜结构域最受欢迎,而CD28是CAR-NK细胞系的首选跨膜结构域 (图3)。 图3. CAR-NK构建中最常用的跨膜区 TM结构域的一个重要方面是,最佳的TM区域应该遵循NK细胞上跨膜蛋白的蛋白质的自然取向(N-到C-末端顺序)。然而,天然的NKG2D是一个例外,其具有C-到N-末端...
到目前为止,唯一公布的CAR-NK临床试验采用了第二代CAR-NK构建,该构建通过加入IL-15表达和诱导Caspase9增强活性。 目前大多数CAR结构依赖于CD3ζ链信号域,强烈的激活信号对于诱导有效的抗肿瘤反应很重要,但也可能导致效应细胞的快速衰竭。因此,共刺激域的组合可用于校准所需的免疫细胞...
目前已设计多种跨膜被用于构建ＣＡＲ，主要来源于ＣＤ３ζ、ＣＤ４、ＣＤ８和ＣＤ２８。跨膜结构域是ＣＡＲ结构最不具特征的区域，一般认为其对ＣＡＲ－ＮＫ的整体结构和功能没有太大的影响。但一些证据显示，跨膜结构域的选择可通过细胞激活程度来影响ＣＡＲ结构的功能。2ＣＡＲ－ＮＫ的研究报道和现状 肿...
CAR-NK就是利用基因工程给NK细胞加入一个能识别肿瘤细胞,并且同时激活NK细胞杀死肿瘤细胞的嵌合抗体。嵌合抗原受体能显著提高NK细胞疗效特异性。这个思路和CAR-T的构建类似:CAR包括胞外的识别结构域(如scFv)识别肿瘤特异性抗原;一个跨膜结构域,和一个胞内信号结构域(CD3ζ 链)可以诱导NK细胞的活化。 图为构建CAR...
如何提高CAR- NK细胞的抗肿瘤功效？NK 细胞不需要识别抗原来杀死癌细胞。NK细胞可以通过释放颗粒酶和穿孔素和诱导ADCC来破坏癌细胞。研究发现，提高 CAR-NK 细胞存活率和功效的方法是将纳米抗体添加到 CAR构建体中。纳米抗体仅由重链结构域组成，可为 CAR 构建体提供稳定性。此外，纳米抗体尺寸小，有助于渗透到肿瘤...
CAR-NK技术创新还需要时间积累,相关基础研究仍需加强。继续丰富CAR-NK构建策略,解决药效和安全性问题。 CAR-NK商业化进程 CAR-NK疗法本身具有独特的抗肿瘤效应,不受MHC限制的细胞毒性、产生细胞因子和免疫记忆等特点,在已有的生产规范加持下,CAR-NK已被各大药企认为最有希望成功商业化的“通用型”抗癌产品。CDE官网...
▲ CAR构建体结构图 图源:参考资料1 增殖 NK细胞占外周单核细胞的10%左右,在用于治疗时需要进行筛选和扩增,同时需要完全清除T细胞,以减少其带来的移植物抗宿主病。目前,人外周单核细胞(PBMC)是最主要的NK细胞来源,具有较强的细胞毒性,但增殖能力较弱。NK细胞的另一个主要来源是脐带血(UCB),通过这种方式产生的NK...