图1常见的CARs的高基底信号诱发的CAR-T耗竭 为了建立一个检测方法来量化CAR基底信号的强度,在Jurkat细胞中表达了含有GFP的CAR构建体,测量CD69的上调作为CAR信号诱导激活的读数。通过GFP的表达计算标准化的CD69表达水平,进一步定义每个样本的“基底信号指数”。GD2.CAR和CSPG4.CAR是两种已知的具有高基底信号的CAR,而C...
在体外测试中，该系统表现出对人类不同癌细胞系的细胞毒性，为了测试其在体内的效果，作者在递送GFP CAR-T细胞48小时前，对荷瘤免疫缺陷（NSG）小鼠单次瘤内注射携带ProTag的或对照菌株，仅ProTag菌株能介导有效的抗肿瘤反应，显著减缓肿瘤生长并提高小鼠生存率，且未产生明显副作用。人类三阴性乳腺癌（TNBC）由于缺...
他们发现,尽管CMV启动子在转导早期使得绿色荧光蛋白(GFP)高表达,但在培养10天后,表达下降到初始表达水平的25%以下。相反,EF1α启动子诱导GFP具有最高的表达水平,并在CD4T细胞和CD8T细胞中以良好的状 由于CAR的异质性表达使得确保单个CAR-T细胞之间保持一致成为一项挑战,因为它们对抗原的亲合力(结合力)可能不同,因此将...
随后,他们以腺相关病毒(AAV)替代PCR扩增子,sgRNA4介导的GFP敲入效率提高至 30%。随后,他们分别检测了抗原刺激T细胞后 GFP 和IFN-γ 的表达情况。结果显示,GFP插入在IFN-γ 3‘UTR不影响IFN-γ表达,且T细胞几乎同步表达GFP和IFN-γ,...
进一步利用GFP融合CAR和溶酶体跟踪器,通过共聚焦显微镜分析CAR的细胞内位置。观察到相当大比例的细胞内CAR似乎与活化的CAR-T细胞中的溶酶体共定位,但不包括静止的CAR-T细胞(图1D)。这些数据综合表明,在遭遇肿瘤抗原后,CAR被下调并会在溶酶体中降解。 受体泛素化参与配体诱导的受体下调和降解。以前的研究已经证明泛素...
通过比较GFP荧光强度发现，CAR-T细胞具有更强的裂解肿瘤团块的能力，并且这群CAR-T细胞对肿瘤的裂解和杀伤具有很强的特异性。在患者中，CAR-T细胞疗法常常伴随着外周血中促炎细胞因子水平的增加。研究人员发现，当存在肿瘤聚集体时，与对照组T细胞相比，细胞因子IL-2、IL-6、TNF-α、IFN-γ和丝氨酸蛋白酶颗粒酶B在...
目前,常用Protein L、靶抗原、Tag标签抗体、ADA(抗抗体)、共表达GFP /tEGFR等去检测CAR表达情况,然而这些方法各有利弊,有些在实际检测中并不适用。 目前CAR检测手段利弊分析 Anti-(G4S)n (B02H1) mAb技术背景 聚甘氨酸-丝氨酸(G4S)接头是一种灵活的非结构化合成肽接头序列,通常用于连接单链可变片段(scFv)的...
图4. 使用流式细胞术检测CAR/GFP修饰的Jurkat-RFP报告细胞的荧光表达(纵坐标:绿色荧光;横坐标:红色荧光)[5]。 体内模型 1●动物肿瘤模型 在CAR-T治疗的临床前研究中,动物肿瘤模型的药效评价尤为重要。由于小鼠基因组与人类基因组的相似程度高,并且小鼠模型的构建成本低,因此小鼠成为了研究人类疾病的最佳实验模型。
信号与靶细胞的死亡呈现正相关。Du S-H等使用DELFIA EuTDA细胞毒性试剂、Raji和Daudi细胞，比较了多种抗CD19 CAR分子的CAR-T细胞的杀伤功能。如下图，相对于对照组Mock和GFP CAR-Ts，几乎所有CAR分子均使得杀伤率显著增加。证明了将CAR-T添加到T细胞亚群和提高细胞杀伤能力是有效的。Copyright: Du S-H, Li Z,...
此外，第8天的肿瘤GFP信号强度下降到与未使用达沙替尼的CAR-T细胞状态相似的水平，表明抗肿瘤细胞毒性维持在基线水平；在CAR-T细胞治疗期间给予达沙替尼（0-8天）：与未治疗的CAR-T细胞和对照T细胞相比，TNF-α和IFN-γ水平较低。然而，这种治疗方案也阻止了CAR-T细胞浸润肿瘤，表明MDA-MB-231肿瘤聚集体的信号强度...