2、消化时间长Caco-2贴壁紧，细胞间连接紧密，细胞容易成片脱落。传代时，建议分次消化（详细步骤见下文）该细胞难以消化成单个细胞，脱落后将细胞吹打成小团即可终止消化。3、贴壁较慢传代或复苏之后，Caco-2需要48小时左右才能完全贴壁。建议将细胞接种至培养器皿后，放进培养箱耐心等待48小时再拿出培养瓶观察，更有...
如果你发现Caco-2细胞不贴壁,首先检查一下培养基中的胎牛血清比例是否为20%。如果比例降低,贴壁性会下降。此时,只需将胎牛血清补充至20%,继续培养1-2天,细胞就会自然贴壁。另外,检查培养基是否偏碱(呈紫红色),因为偏碱的环境可能影响细胞的贴壁能力。 能否用DMEM替代MEM? 可以。DMEM(Dulbecco's Modified Eagle ...
Caco2细胞是常见的结肠腺癌细胞,正常情况下,Caco2细胞在培养的过程中贴壁生长,其形态多为多边形或梭形,增殖速度较快,其镜下形态如下图所示,密度已大于90%,可以进行传代。 图:Caco2细胞形态(来自小红书用户“灰星explorer”) 培养方法 1.培养基配置:DMEM高糖培养基+10%胎牛血清+1%青霉素链霉素双抗+1%谷氨酰胺。
1️⃣ 将Caco-2细胞从培养箱中取出,当细胞长至80-90%时,弃掉培养基,用加了双抗的PBS清洗2-3遍。 2️⃣ 消化:向培养皿或瓶中加入适量胰酶(例如,10cm皿用3毫升,6cm皿及T25瓶用1毫升)。铺匀后放入培养箱中消化。如果是新开封且未使用几次的胰酶,消化4分钟;若胰酶解冻次数较多,消化时间为7分钟。
我们可以看一下如下图2和图3。正常的Caco-2细胞呈岛状生长，细胞间连接紧密，细胞群的边界光滑，细胞...
建议将细胞接种至培养器皿后,放进培养箱耐心等待48小时再拿出培养瓶观察,更有利于细胞贴壁。此外还需注意血清对贴壁的影响,血清的比例低于20%时,Caco-2细胞贴壁时间延长,甚至不贴壁。 4、生长缓慢 80%密度1:2传代的前提下,Caco-2通常需要培养5-7天再传代。 03Caco-2细胞传代方法 1. 准备所需的培养基、胰酶、...
2️⃣ 轻轻吹打细胞,避免力度过大。 3️⃣ 将细胞悬液加入离心管,平衡后离心。🌱传代技巧: 1️⃣ 观察离心后细胞分布。 2️⃣ 轻柔吹打细胞悬液。 3️⃣ 根据传代比例,缓缓注入细胞。 4️⃣ 轻轻晃动培养瓶,使细胞分布均匀。 5️⃣ 放置于37℃,5%二氧化碳培养箱中培养4-8小时。...
Caco-2细胞系分离自一位72岁男性直肠原位癌,其结构和生化作用类似于人小肠上皮细胞,常被用于药物的渗透性测定,研究药物双向转运情况。实验中考察时间和药物浓度等因素,计算表观渗透系数｡经验证,被动扩散的药物用此模型测得的数据与人体较为一致。 Caco-2细胞模型是首个被国外制药企业以及实验室应用的模拟肠道吸收...
培养Caco-2细胞(人结直肠腺癌细胞)时,需要注意以下几点: 细胞贴壁紧密,消化时间较长。消化时,边缘细胞会先脱落。可以将正在消化的胰酶吸取出来,吹下细胞收集到装有完全培养基的离心管中,然后再加新的胰酶继续消化剩余的细胞。 细胞生长速度较慢,建议按1:2的比例进行传代,传代前细胞密度不宜过低。
1. 上皮细胞样,贴壁生长,细胞形态各异,部分细胞内部含巨大有液泡。细胞可自发分化为肠上皮样细胞,是常用的肠癌细胞模型。 2. 推荐使用MEM培养基,含20%胎牛血清,在37度、5%二氧化碳培养箱中培养,细胞较难消化且贴壁时间较长。 3. Caco-2增速极慢,倍增时间约3-4天,推荐传代比例1:2至1:4,传代周期4-5天。