一、蛋白定量BCA(Bicinchoninic Acid)法 BCA (bicinchonininc acid)与二价铜离子的硫酸铜等其他试剂组成的试剂,混合一起即成为苹果绿,即BCA工作试剂。在碱性条件下,BCA与蛋白质结合时,蛋白质将Cu2+还原为Cu+,一个Cu+螯合二个BCA分子,工作试剂由原来的苹果绿形成紫色复合物,562nm处有最高的吸收值,可在540-595...
一、蛋白定量BCA(Bicinchoninic Acid)法 BCA (bicinchonininc acid)与二价铜离子的硫酸铜等其他试剂组成的试剂,混合一起即成为苹果绿,即BCA工作试剂。在碱性条件下,BCA与蛋白质结合时,蛋白质将Cu2+还原为Cu+,一个Cu+螯合二个BCA分子,工作试剂由原来的苹果绿形成紫色复合物,562nm处有zui高的吸收值,可在540-59...
最常用的蛋白质定量分析方法主要是BCA法和Bradford法,这两种方法各有所长,研究者需要根据裂解液的情况,进行选择。 关于实验的原理: BCA法实验原理: 碱性条件下,蛋白质分子中的肽键结构能与Cu2+结合生成紫色络合物,同时将Cu2+还原为 Cu+。BCA试剂可灵敏特异的与Cu+结合,形成稳定的有颜色的络合物,562nm处有最高的...
BCA法:该方法可以兼容样品中高达5%的SDS,5%的Triton X-100,5%的Tween 20、60、80。但该方法受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响,需确保EDTA低于10mM,无EGTA,二硫苏糖醇(DTT)低于1mM,β-巯基乙醇(β-Mercaptoethanol)低于0.01%。 Bradford法:该方法样品中β-巯基乙醇(β-Mercaptoethanol)的浓度可高达1M,二硫苏糖醇...
Bradford法检测浓度下限可以达到25μg/mL,最小检测蛋白量达到1μg,在 50~1000 µg/mL浓度范围内有良好的线性关系。 反应速度以及反应产物稳定性: BCA 法测定需要反应时间,每个样品需要 45 min左右可以完成检测。反应(保温)结束后,需要在10 min 内完成后续测定,因为光吸收值会按照2.5%/10 min的比例升高。
BCA蛋白定量和 Bradford法蛋白定量有哪些区别 一、原理不同BCA蛋白定量:碱性条件下,蛋白将Cu2+还原为Cu+, Cu+与BCA试剂形成紫颜色的络合物,吸光强度与蛋白浓度成正比。测定其在562nm处的吸收值,并与标准曲线对比,即可计算待测蛋白的浓度。Bradford法蛋白定量:在一定
1、Bradford法测得的主要是碱性氨基酸和芳香族氨基酸,BCA则没有选择性 2、BCA法蛋白浓度定量是二价铜...
目前实验室里常用的蛋白定量的方法通常主要有三种: BCA蛋白定量、Bradford蛋白定量法和紫外分光法。 BCA蛋白定量的实验原理是在碱性条件下,H | NH2---C-COOH | R 将Cu²+还原为CU+与 BCA 结晶为紫色的化合物,再通过测定 562 nm波长OD值来判定还原剂的含量。 下列...
但是,基于Bradford法的原理,会由于各种蛋白质中的碱性氨基酸和芳香族氨基酸的含量不同,导致不同蛋白质测定时有较大的偏差。而BCA法有着高度的均一性,相对于Bradford染料结合方法而言,不同蛋白质之间的变异性更小;同时具有较高的线性,线性范围在20至2000 µg/mL。