为了研究大疱性类天疱疮(BP)的BP180抗原上的抗体结合表位,了解BP血清中抗体与BP180NC16a融合蛋白反应的关系,进一步探讨分子生物学技术运用于表皮下大疱性皮肤病的病因分析和临床诊断,用基因工程技术,制备原核细胞内表达的完整性BP180NC16a区段融合蛋白,以此为抗原用免疫印迹法检测了64例BP血清、2例瘢痕性类天疱疮...
目的:用基因工程技术制备人源性抗大疱性类天疱疮抗原BP180单链抗体(scFv),并对其抗原结合特性等进行鉴定.方法:利用基因重组技术对从噬菌体抗体库中克隆的人源性抗大疱性类天疱疮抗原BP180-NC16A抗体Fab片段进行改造获得scFv,进行DNA测序,同时用ELISA鉴定其抗原结合活性和特异性,免疫荧光技术检测scFv与人皮肤组织BP18...
第一部分BP180NC16A IgE ELISA检测方法的建立目的建立抗BP180NC16A IgE抗体检测方法,评价其在大疱性类天疱疮中的意义.方法原核表达GST-NC16A融合蛋白,并纯化.采用棋盘滴定法确定抗原包被浓度,明确二抗及待测标本最佳稀释度,确定最佳实验条件.对56例大疱性类天疱疮患者,24例正常对照血清以及18例天疱疮,1例SJS患者...
结果 原核表达系统pGEX-2TBP180NC16A表达37 000GST/NC16A融合蛋白,微珠亲和层析法纯化后得单一抗BP180 NC16A抗体.经ELISA方法定量后确定其含量为2.4 mg/ml;该抗体能与人皮肤基底膜带结合,证明抗体活性;免疫印迹可见单一片段,显示抗体纯度.结论 微珠亲和层析法纯化的BP和HG患者血清中抗BP180 NC16A自身抗体活性高...
目的 建立并优化大疱性类天疱疮(BP)抗BP180NC16A IgG抗体亚型的酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法,评估其敏感性和特异性.方法 通过在大肠杆菌中表达并纯化GSTBP180NC16A重组蛋白,建立抗BP180NC16A IgG亚型的ELISA检测方法,检测2009至2012年北京协和医院136例BP患者血清中抗体水平,以20名健康体检者血清作为对照;阳性...
目的 构建噬菌体抗体库并筛选抗BP180-NC16A抗体.方法 以大疱性类天疱疮(BP)患者外周血淋巴细胞为基因来源,扩增多样性的轻链和重链Fd段基因,构建Fab段表面展示的噬茵体抗体库,用BP180分子的NC16A片段为抗原对抗体库进行筛选并对筛选得到的抗体用ELISA,Western blot和免疫荧光等方法进行鉴定.结果 经过轻,重链基因的...