而六碱基的酶大约4096(46)个核苷酸有一个识别序列,计算是在假定核苷酸随机排列的情况下进行的.实践中这种方法不完全正确,如λ DNA长49kb,对于六碱基的酶应该有12个切割位点,实际上要少一些,如Bgl II只有6个,BamHI只有5个,而SalI只有2个. 二,甲基化酶 在专一位点上甲基化,与限制性内切酶相对应. (一)大肠杆菌中的甲基化酶 dam甲
🔹通用规则:多数酶需在酶切位点两侧各加2-3个保护碱基(如EcoRI、BamHI)。 🔹特殊酶类:HindIII:需至少3个保护碱基(如添加GGG或CCC);NdeI:需至少6个保护碱基以确保高效切割。 🔹末端酶切:若酶切位点靠近DNA末端(如PCR产物),部分酶需6个以上保护碱基(如SalI)。 2. 碱基选择 🔹GC偏好:优先选择G/C...
🔹通用规则:多数酶需在酶切位点两侧各加2-3个保护碱基(如EcoRI、BamHI)。 🔹特殊酶类:HindIII:需至少3个保护碱基(如添加GGG或CCC);NdeI:需至少6个保护碱基以确保高效切割。 🔹末端酶切:若酶切位点靠近DNA末端(如PCR产物),部分酶需6个以上保护碱基(如SalI)。 2. 碱基选择 🔹GC偏好:优先选择G/C...