一、ARMS-PCR原理 ARMS-PCR的原理基于聚合酶链式反应(PCR)和特异性引物的设计。其基本步骤如下: 1.引物设计:设计特异性的引物,包括ARMS正向引物、ARMS逆向引物和内部控制引物。ARMS正向引物与ARMS逆向引物的3'端分别与基因突变位点的等位基因和野生型等位基因互补。内部控制引物与ARMS逆向引物的3'端互补,用于确定PCR...
其原理主要基于引物的设计和PCR扩增技术。在该方法中,通过合理设计特定引物,实现对目标基因的突变或多态性位点进行检测。 对于要检测的位点,设计两对引物,其中一对引物是特异性引物(allele-specific primers),另一对引物是控制引物(external control primers)。特异性引物用于特异扩增突变或多态性位点的目标基因片段,而...
其基本原理是设计两条特异性ARMS引物,引物3'端最后一个碱基分别与野生型或突 变型碱基相同,另外一条是通用型反向引物。在进行PCR反应时,由于Taq DNA聚合酶缺少3' -5'外切酶活性,若引物3'端形成错配,链延伸反应受阻,在一定扩增循环内,不会检测出 特异的扩增产物;反之,3 '端配对则能够检测出扩增产物。[0004] ...
根据T-ARMS-PCR 的引物设计原则,该团队针对ACEI/D分别设计了两对引物,以扩增插入型模板和缺失型模板。并分别对四条引物进行标记,两条外引物的 5'-末端标记地高辛,扩增缺失型模板的内引物的 5'-末端标记Cy5 染料,扩增插入型模板的内引物的 5'末端标记生物素。结合侧流层析系统,通过标记物和固定在层析试纸条硝酸...
ARMS-PCR即扩增阻滞突变系统PCR(Amplification Refractory Mutation System PCR,ARMS-PCR),又称为等位基因特异性PCR(Allele-Specific PCR,AS-PCR),通过引物3’末端引物设计控制等位基因特异性延伸,并结合Taqman探针的方法检测荧光信号值,从而判断野生型等位基因和突变型野生基因。
通过构建NPM1基因野生型和最常见的突变型A 、B 、C 、D 重组质粒作为检测对象，根据NPM1不同突变体碱基排列方式不同，设计1对特异性引物，使得上游引物3'末端的碱基与突变体A 、B 、C 、D 匹配，而与野生型NPM1不匹配;通 过条件优化，建立检测多种NPM1突变的AＲMS-PCＲ的方法。通过对该方法的检测范围、...
2.在反应中不同的ARMS产物是有基本大小差别的。最好设计ARMS产物大小有>50bp 的差别。在相同的实验中有必要使用一个 PCR 扩增较大片段产物的对照;在寡核苷酸链引物中列出可选择的两个程序(参见附录中对照引物配方)。 3.合并几种ARMS反应成两重反应体系。除去正常和突变的反应,则两个多重反应包含一些反应体系和...
The main obstacle encountered in mapbased cloning approaches is the insufficient number of PCR-based molecular markers available to perform fine-structure mapping. However, public accessibility to the complete and annotated sequence of the Arabidopsis genome should greatly facilitate map-based cloning, ...
tetra-primer arms-pcr技术需要根据其具体snp位点设计4条不同的引物,分别在snp位点两侧设计2条内引物和在snp位点上下游不同距离分别设计2条外引物。在传统的tetra-primer arms-pcr中,一般直接用电泳来检测扩增产物。tetra-primer arms pcr反应由于tetra-primer arms pcr反应中的上游引物和下游引物到突变点距离有差异,...