Annexin V/PI 流式细胞术分析细胞凋亡,结果中右下角的第二象限代表( )A.. 活细胞B.. 凋亡晚期细胞C.. 凋亡早期细胞D.. 坏死细胞
三、结果与分析 圈门逻辑:图1通过前向(FSC)和侧向(SSC),分别圈出对照组和H2O2诱导组的HeLa细胞范围,诱导凋亡组的细胞已呈现出分群的趋势;图2为 Annexin V/PI双标记的结果,2A所示对照组的HeLa细胞处于正常状态,有少许凋亡晚期的细胞,属于正常培养凋亡;经H2O2诱导HeLa细胞出现了显著的早期凋亡现象, 比例由1.06%增...
Annexin V是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力,故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将Annexin V进行荧光素(EGFP、FITC)标记,以标记了的Annexin V作为荧光探针,利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测...
PI不可透过正常的细胞膜,可透过凋亡中晚期以及坏死细胞的细胞膜,适用于在排除细胞坏死的前提下细胞凋亡中晚期检测。将Annexin V与PI同时使用,通过分群表征出正常、坏死、凋亡和机械性损伤的细胞。在该实验中,我们对HeLa细胞的对照组和H2O2诱导组进行Annexin V/PI双标记,经流式细胞仪检测出不同特性的细胞群。 关键词...
4、流式细胞仪定量分析(目前较为常用的方法,也是本期学习的主要内容)细胞发生凋亡时,其细胞膜的通透性也增加,但是其程度介于正常细胞与坏死细胞之间。利用这一特点,被检测细胞悬液用荧光素染色,利用流式细胞术检测细胞悬液中细胞荧光强度来区分...
流式细胞术检测细胞凋亡(Annexin V-FITC/PI 双染法) 一、原理 1、Annexin V-FITC 在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸(PS)只分布在细胞膜脂质双层的内侧,而在细胞凋亡早期,细胞膜中的磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力,故可通...
二、结果分析 (图片来源网络) 在二维散点图上,Annexin V是X轴,PI是Y轴,十字门将图片分为四个象限。其中根据Annexin V染色分为左右两部分,右侧(Q2/3)为Annexin V染色阳性;根据PI染色分为上下两部分,上方(Q1/2)为PI染色阳性。一般认为Annexin V单染的细胞是凋亡早期的细胞,PI单染的细胞是已经死亡的细胞,而...
Annexin V细胞凋亡检测外周血淋巴细胞实验操作步骤目的:研究流式细胞术用Annexin V/PI双染方法来检测细胞凋亡的合理的实验操作步骤.方法:将Annexin V/PI中的抗体先加入到单个细胞样本中,再加入PI,最后加入Buffer工作液,反应30min后再加入Buffer工作液上机.结果:图像清晰,细胞凋亡率明显增加并与临床和科研的结果一致....
在细胞凋亡晚期,细胞膜失去完整性,Annexin V能通过PS进入到细胞内部。 染DNA的细胞活性染料可以用来区分凋亡晚期和坏死细胞(Annexin V染色阳性;DNA活性染料染色阳性)与凋亡早期的细胞(Annexin V染色阳性;DNA活性染料染色阴性)。 Annexin V+ PI-的细胞群中含有凋亡早期的细胞未经过处理(左图)或经过10μM喜树碱...
AnnexinV-FITCPI双染法流式细胞术检测细胞凋亡 看到来我们眼科公共平台来使用Fortessa检测凋亡时,看到很多人都是泪流满面,鉴于此,作者大找网络资源结合自己的理解,针对普遍的问题给眼科的童鞋们一个交代,期待对大家有用,期待大家板砖!! Reference 1. Galluzzi L, Aaronson SA, Abrams J, et al. Guidelines for ...