PI是一种DNA染料,只有在细胞膜破裂后才能进入细胞内结合到DNA上,因此PI可以用来检测细胞凋亡的后期阶段。 在Annexin V-PI双染色法中,首先使用含有Annexin V荧光标记的染料将细胞进行染色,荧光显微镜下观察细胞,此时可以检测到细胞膜上的PS,以及处于早期凋亡的细胞;然后再加入PI染料,使其进入细胞内,此时可以检测到处于...
Annexin-V染色原理 凋亡早期，细胞膜内侧的磷脂酰丝氨酸（PS）从胞质转至胞外。Annexin-V（模联蛋白-V）。是一种磷脂结合蛋白，与PS有强亲和力。操作步骤（贴壁细胞为例）1、对照管的设置 1）空白管：诱导凋亡的细胞不加染料，用来调节电压；2）单染管：分别需要只加PI和荧光标记的Annexin V两个单染管，用来调...
Annexin V-FITC/PI法的原理： 正常细胞(活细胞)具有完好的细胞膜，此时细胞膜的组分之一——磷脂酰丝氨酸(phosphotidylserine，PS)位于细胞膜的内侧，当细胞发生凋亡时，细胞膜的结构发生改变，这使得原本在细胞膜内侧的PS外翻到细胞膜的表面，这种现象在凋亡的早期就会出现，因此就可以用与PS具有高亲和力、标记了荧...
Annexin VPI检测法原理 Annexin V是一种钙依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力特异性结合。它不能透过完整的细胞膜，而早期凋亡细胞的细胞膜是完好的，对PI有拒染性。但在凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能透过细胞膜而使细胞核染上。因此Annexin V 和PI同时使用，可以将凋亡早期的细胞与其它细胞区别开来。Annexin V...
Annexin-V为Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,对PS有极强的结合力。PI是一种经济、稳定的核酸染料,它不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整的细胞膜,但可以透过凋亡晚期和坏死细胞的细胞膜而使细胞核染红。 将Annexin V与PI联合使用时,PI被排除在活细胞和早期凋亡细胞之外,而晚期凋亡细胞和坏死细胞同时被FITC和PI结合染色呈现...
Annexin V是一种能够与PS结合的蛋白质,而且这种结合是钙依赖的。也就是说,只有在钙离子存在的情况下,Annexin V才能与凋亡细胞膜外层的PS结合。这种结合使得我们可以通过荧光显微镜观察到凋亡细胞的特定区域。 PI的加入:双重染色增强效果 🌈为了更准确地检测细胞凋亡,我们通常会使用两种染料:Annexin V和PI(碘化丙啶...
图1 Annexin V/PI检测原理。实验流程：（1）收集细胞：在进行完细胞凋亡刺激后，用预冷的PBS洗涤细胞2次，4℃离心5min，（贴壁细胞使用不含EDTA的胰酶消化）；（2）重悬细胞：取1～5×105个重悬的细胞，离心弃掉PBS，加入Annexin V-FITC结合液轻轻重悬；（3）染色：加入Annexin V-FITC和PI Staining Solution，...
Annexin V/PI双染色法的缺点 1、制备贴壁细胞样品时，容易因消化和吹打造成细胞额外损伤，从而夸大了实验结果，增加了数据变异度。2、凋亡细胞的本底荧光或非特异染色的特性会增强，导致荧光飘移，导致定量不准。实验交付内容 1、所有实验的原始数据（包括实验过程、实验试剂与设备等）；2、检测报告与结果分析（流式...
而PI是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但在细胞凋亡发生中晚期,由于细胞膜通透性增加,PI透过细胞膜从而标记细胞核DNA。因此Annexin V和PI联合使用,可同时用来鉴定活细胞、凋亡早期细胞、凋亡晚期细胞以及核碎片,原理如图一。 图1 细胞凋亡检测 然而在实际进行...
其中，Annexin-V/PI双染就是一种常用的方法。接下来，我们将详细介绍Annexin V/PI双染法的原理和应用。正常细胞的细胞膜中，磷脂酰丝氨酸（PS）位于细胞膜磷脂双分子层的内层，这使得Annexin V和PI都无法与其结合。然而，在细胞凋亡的早期阶段，PS会从细胞膜的内层转移到外层。Annexin V，作为一种分子量为35~36...